Analiza Western blot a cantităților indicate de DMEM/FBS și BSA utilizând BSA (D1C8Q) Rabbit mAb.

BSA (D1C8Q) Rabbit mAb 23053

D1C8Q Rabbit

Analiza Western blot a cantităților indicate de DMEM/FBS și BSA utilizând BSA (D1C8Q) Rabbit mAb.

  • Reprezentantul local
  • Informațiile dvs. locale de cumpărare
  • Garantează anticorpii
  • FAQ
  • Suport tehnic
  • Certificat de analiză
  • Date suport
  • produse asemanatoare
  • Utilizarea produsului
  • Protocoale
  • fundal
  • Căi și proteine
  • Referințe și recenzii

Date suport

REACTIVITATE B
SENSIBILITATE Recombinant
MW (kDa) 67
Sursă/izotip Iepure IgG

Cheie de aplicare:

  • W-Occidental
  • IP-Imunoprecipitare
  • IHC-Imunohistochimie
  • CIP-Imunoprecipitarea cromatinei
  • DACĂ-Imunofluorescența
  • F-Citometrie în flux
  • E-P-ELISA-peptidă

Cheia de reactivitate încrucișată a speciilor:

  • H-Uman
  • M-Șoarece
  • R-Război
  • Hm-Hamster
  • Mk-Maimuţă
  • Noi-Nurcă
  • C-Pui
  • Dm-D. melanogaster
  • X-Xenopus
  • Z-Zebrafish
  • B-Bovin
  • Dg-Câine
  • Pag-Porc
  • Sc-S. cerevisiae
  • Ce-C. elegans
  • HR-Cal
  • Toate-Toate speciile așteptate
BSA (D4L9G) Mouse mAb # 66271
FXR/NR1H4 (E4B8P) Mouse mAb # 72105
Anticorp β2-microglobulină # 59035
Transtiretină (D8T4Q) Rabbit mAb # 29872
β2-microglobulină (D8P1H) iepure mAb # 12851
Anticorp albumină # 4929
C-Reactive Protein (D1N1U) Rabbit mAb # 14316
Anticorp lisozim C-1/2 # 61137
Anticorp lisozim C # 55164
β2-microglobulină (D8P1H) mAb de iepure (conjugat PE) # 14730

Informații despre utilizarea produsului

Depozitare

Livrat în 10 mM sodiu HEPES (pH 7,5), 150 mM NaCI, 100 μg/ml gelatină, 50% glicerol și mai puțin de 0,02% azidă de sodiu. A se păstra la –20 ° C. Nu alicotați anticorpul.

Protocol

Protocolul Western Blotting

Pentru Western blots, incubați membrana cu anticorp primar diluat în 5% greutate/volum lapte uscat fără grăsime, 1X TBS, 0,1% Tween ® 20 la 4 ° C cu agitare ușoară, peste noapte.

NOTĂ: Vă rugăm să consultați pagina web a produsului anticorp primar pentru diluarea recomandată a anticorpilor.

A. Soluții și reactivi

NOTĂ: Pregătiți soluții cu osmoză inversă deionizată (RODI) sau apă de calitate echivalentă.

B. Blotarea proteinelor

Un protocol general pentru prepararea probei.

  1. Tratați celulele prin adăugarea de medii noi care conțin regulator pentru timpul dorit.
  2. Aspirați mass-media din culturi; spălați celulele cu 1X PBS; aspirat.
  3. Lizați celulele adăugând 1X tampon de probă SDS (100 perl per godeu de placă cu 6 godeuri sau 500 (l pentru o placă de 10 cm diametru). Îndepărtați imediat celulele de pe placă și transferați extractul într-un tub de microcentrifugă. Păstrați pe gheață.
  4. Sonicați timp de 10-15 secunde pentru a finaliza liza celulară și tăiați ADN-ul (pentru a reduce vâscozitatea probei).
  5. Se încălzește un eșantion de 20 de probe la 95-100 ° C timp de 5 minute; rece pe gheață.
  6. Microcentrifuga timp de 5 min.

Încărcați 20 de ontol pe gelul SDS-PAGE (10 cm x 10 cm).

NOTĂ: Se recomandă încărcarea markerilor de greutate moleculară preconizați (# 13953, 10 µl/bandă) pentru a verifica electrotransferul și scara de proteine ​​biotinilate (# 7727, 10 µl/bandă) pentru a determina greutățile moleculare.

  • Electrotransfer la membrana de nitroceluloză (# 12369).

    • C. Blocarea membranei și incubațiile de anticorpi

    NOTĂ: Volumele sunt pentru membrană de 10 cm x 10 cm (100 cm 2); pentru membrane de dimensiuni diferite, reglați volumele în mod corespunzător.

    I. Blocarea membranei

    1. (Opțional) După transfer, spălați membrana de nitroceluloză cu 25 ml TBS timp de 5 minute la temperatura camerei.
    2. Se incubează membrana în 25 ml de tampon de blocare timp de 1 oră la temperatura camerei.
    3. Se spală de trei ori timp de 5 min fiecare cu 15 ml TBST.

    II. Incubația primară a anticorpilor

    1. Incubați membrana și anticorpul primar (la diluarea și diluantul adecvat, așa cum se recomandă în pagina web a produsului) în 10 ml tampon de diluare a anticorpului primar cu agitare ușoară peste noapte la 4 ° C.
    2. Se spală de trei ori timp de 5 min fiecare cu 15 ml TBST.
    3. Incubați membrana cu IgG anti-iepure, anticorp legat de HRP (# 7074 la 1: 2000) și Anti-biotină, anticorp legat de HRP (# 7075 la 1: 1000–1: 3000) pentru a detecta markeri de proteine ​​biotinilate în 10 ml de tampon de blocare cu agitare ușoară timp de 1 oră la temperatura camerei.
    4. Se spală de trei ori timp de 5 min fiecare cu 15 ml TBST.
    5. Continuați cu detectarea (secțiunea D).

    D. Detectarea proteinelor

    Instrucțiunile de utilizare:

    1. Se spală HRP legat de membrană (anticorp conjugat) de trei ori timp de 5 minute în TBST.
    2. Pregătiți 1X Reactiv ECL SignalFire ™ (# 6883) prin diluarea unei părți Reactiv 2X A și o parte Reactiv B 2X (de exemplu, pentru 10 ml, adăugați 5 ml Reactiv A și 5 ml Reactiv B). Amesteca bine.
    3. Se incubează substratul cu membrană timp de 1 minut, se îndepărtează soluția în exces (membrana rămâne umedă), se înfășoară în plastic și se expune la film cu raze X.

    * Evitați expunerea repetată la piele.

    postat în iunie 2005

    revizuit în iunie 2020

    ID protocol: 263

    Specificitate/Sensibilitate

    BSA (D1C8Q) mAb de iepure recunoaște proteina totală a albuminei bovine. Anticorpul nu detectează albumina umană. Notă: Pentru cele mai bune rezultate, evitați reactivii care conțin BSA.

    Reactivitatea speciilor:

    Sursă/purificare

    Anticorpul monoclonal este produs prin imunizarea animalelor cu proteină BSA recombinantă bovină.

    fundal

    Albumina serică bovină (BSA) este cea mai abundentă proteină din plasmă. Albumina este sintetizată în principal în ficat și este o componentă majoră de transport pentru mulți compuși endogeni și exogeni, inclusiv acizi grași, hormoni steroizi, metaboliți și medicamente. De asemenea, este responsabil pentru menținerea presiunii osmotice coloidale și poate afecta integritatea microvasculară (1).

    Căi și proteine

    Explorează căi + proteine ​​legate de acest produs.

    Proteine ​​din amonte/aval

    STRING - Interacțiuni Proteină-Proteină Cunoscute și Prevăzute.