Prezentare generală a virusurilor LAIV utilizate în acest studiu. (A) Reprezentarea schematică a structurii himerice a proteinei HA. (B) Compoziția genomului virusurilor reasortante LAIV salvate în acest studiu.

Prezentare generală a proiectării studiului (A) și desemnării grupurilor de studiu (B).

Siguranța imunizării secvențiale a dihorilor. (A) Procentaj de schimbare a greutății corporale. (B) Zona sub curba deltei T în raport cu temperatura inițială pentru fiecare dihor pe durata fazei de imunizare. (C) Scoruri pentru semnele clinice ale infecției gripale la dihori pe toată durata imunizării. Nu s-au observat diferențe semnificative pentru niciunul dintre parametri.

Replicarea virusurilor LAIV în tractul respirator superior al dihorilor imunizați după prima doză de vaccin (A), a doua (B) și a treia (C).

Răspunsurile imune ale anticorpilor HAI la dihorii imunizați măsurați împotriva unui grup de viruși. (A) H5 NP/MDV LAIV. (B) H8 NP/MDV LAIV. (C) H9 NP/MDV LAIV. (D) Virus de tip sălbatic A/hering gull/Sarma/51/2006 (H6N1). (E) virusul cH11/1N1 LAIV care poartă gena HA himerică (domeniul tulpinii HA din Cal09 și domeniul capului HA al A/shoveler nordic/Olanda/18/99 (H11N9)) și gena NA din Cal09. (F) A/Africa de Sud/3626/2013 (pH1N1) virus de tip sălbatic. Titrurile HAI pentru antigenele H5 și H8 au fost determinate folosind celule roșii din sânge; restul de antigeni au fost testați cu eritrocite de pui. * indică o diferență semnificativă cu grupul vaccinat simulat. Linia punctată indică limita de detectare.

Reactivitatea încrucișată a răspunsurilor induse de anticorpi. Titrurile de anticorp final IgG serice la dihorii imunizați au fost măsurate prin ELISA împotriva: antigenului virusului întreg (A) H5 NP/MDV LAIV; H8 proteină HA de lungime completă (B); Proteină H9 de lungime completă (C); H3 proteină de lungime completă HA (D); H6 proteină de lungime completă HA (E); antigenul virusului întreg pH1N1 (F); cH6/1 proteină HA himerică (G); și proteina recombinantă lungă alfa helix 1 (LAH1) (H). * indică o diferență semnificativă cu grupul vaccinat simulat. Linia punctată indică limita de detectare.

Activitatea de neutralizare a răspunsurilor induse de anticorpi. Răspunsurile la anticorpi larg neutralizanți la dihorii imunizați au fost măsurate în testul de microneutralizare de 50% (MNT50) împotriva: virusului H5 NP/MDV LAIV (A); H8 NP/MDV LAIV (B); H9 NP/MDV LAIV (C); A/Africa de Sud/3626/2013 (pH1N1) virus (D); și virusul LAH cH11/1N1 (E). * indică o diferență semnificativă cu grupul vaccinat simulat. Linia punctată indică limita de detectare.

Replicarea virusului provocator H1N1pdm09 în tractul respirator al dihorilor imunizați. (A) Titruri de viruși în fluidele de spălare nazală la fiecare moment în timpul fazei de provocare și ASC ale titrurilor virale NFW pentru dihori individuali. (B) Titluri virale în trahee. (C) Titluri virale în plămâni. * indică o diferență semnificativă cu grupul vaccinat simulat (testul Mann-Whitney U).

Semne clinice ale infecției gripale la dihorii imunizați după provocare. (A) Dinamica schimbării greutății corporale în timpul fazei de provocare. (B) Suprafața sub curba modificării procentuale a greutății corporale pentru fiecare dihor. (C) Suma scorurilor pentru semnele clinice pentru fiecare dihor în cele patru zile după provocare. * Diferență semnificativă față de grupul vaccinat simulat (testul Mann-Whitney U).

Temperatura corpului dihorilor imunizați după provocare. (A) Variația temperaturii corpului în faza de provocare. Cele câteva scăderi accentuate ale temperaturii sunt rezultatul sedării în timpul provocării (D63) și al colectării fluidelor de spălare nazale. (B) Creșterea maximă a temperaturii corpului peste faza de provocare. (C) Zona sub curba deltei T în raport cu temperatura de referință pentru fiecare dihor în faza de provocare. Sunt indicate diferențele statistice cu grupul vaccinat simulat (testul Mann-Whitney U); ns = nesemnificativ.

Patologia tractului respirator superior al dihorilor imunizați la patru zile după provocare. (A) Patologie brută (GP) a turbinatelor nazale (panoul superior). Histopatologia NT (panoul mediu) și traheea (panoul inferior). (B) Procentul de țesuturi nazale afectate. (C) Analiza semicantitativă a patologiei infecției NT. H&E - hematoxilină și eozină. AB - albastru alcian. Sunt indicate diferențele statistice cu grupul vaccinat simulat (testul Mann-Whitney U); ns = nesemnificativ.

Patologia tractului respirator inferior al dihorilor imunizați la patru zile după provocare. (A) Patologia grosieră (GP) a plămânilor dihorilor (panoul superior). Histopatologia plămânilor cu diferiți coloranți (panouri medii și inferioare). (B) Procentul țesuturilor pulmonare afectate. (C) Analiza semicantitativă a patologiei infecției pulmonare. H&E - hematoxilină și eozină. P-M - pata picro-Mallory. Sunt indicate diferențele statistice cu grupul vaccinat simulat (testul Mann-Whitney U); ns = nesemnificativ.

Abstract

secvențială

Prezentare generală a virusurilor LAIV utilizate în acest studiu. (A) Reprezentarea schematică a structurii himerice a proteinei HA. (B) Compoziția genomului virusurilor reasortante LAIV salvate în acest studiu.

Prezentare generală a proiectării studiului (A) și desemnării grupurilor de studiu (B).

Siguranța imunizării secvențiale a dihorilor. (A) Procentaj de schimbare a greutății corporale. (B) Zona sub curba deltei T în raport cu temperatura inițială pentru fiecare dihor pe durata fazei de imunizare. (C) Scoruri pentru semnele clinice ale infecției gripale la dihori pe toată durata imunizării. Nu s-au observat diferențe semnificative pentru niciunul dintre parametri.

Replicarea virusurilor LAIV în tractul respirator superior al dihorilor imunizați după prima doză de vaccin (A), a doua (B) și a treia (C).

Răspunsurile imune ale anticorpilor HAI la dihorii imunizați măsurați împotriva unui grup de viruși. (A) H5 NP/MDV LAIV. (B) H8 NP/MDV LAIV. (C) H9 NP/MDV LAIV. (D) Virus de tip sălbatic A/hering gull/Sarma/51/2006 (H6N1). (E) virusul cH11/1N1 LAIV care poartă gena HA himerică (domeniul tulpinii HA din Cal09 și domeniul capului HA al A/shoveler nordic/Olanda/18/99 (H11N9)) și gena NA din Cal09. (F) A/Africa de Sud/3626/2013 (pH1N1) virus de tip sălbatic. Titrurile HAI pentru antigenele H5 și H8 au fost determinate folosind celule roșii din sânge; restul de antigeni au fost testați cu eritrocite de pui. * indică o diferență semnificativă cu grupul vaccinat simulat. Linia punctată indică limita de detectare.

Reactivitatea încrucișată a răspunsurilor induse de anticorpi. Titrurile serice de anticorpi IgG în serii imunizați au fost măsurate prin ELISA împotriva: antigenului virusului întreg (A) H5 NP/MDV LAIV; H8 proteină HA de lungime completă (B); Proteină H9 de lungime completă (C); H3 proteină de lungime completă HA (D); H6 proteină de lungime completă HA (E); antigenul virusului întreg pH1N1 (F); cH6/1 proteină HA himerică (G); și proteina recombinantă lungă alfa helix 1 (LAH1) (H). * indică o diferență semnificativă cu grupul vaccinat simulat. Linia punctată indică limita de detectare.

Activitatea de neutralizare a răspunsurilor induse de anticorpi. Răspunsurile la anticorpi neutralizanți pe scară largă la dihorii imunizați au fost măsurate în testul de microneutralizare 50% (MNT50) împotriva: virusului H5 NP/MDV LAIV (A); H8 NP/MDV LAIV (B); H9 NP/MDV LAIV (C); A/Africa de Sud/3626/2013 (pH1N1) virus (D); și virusul LAH cH11/1N1 (E). * indică o diferență semnificativă cu grupul vaccinat simulat. Linia punctată indică limita de detectare.

Replicarea virusului provocator H1N1pdm09 în tractul respirator al dihorilor imunizați. (A) Titruri de viruși în fluidele de spălare nazală la fiecare moment în timpul fazei de provocare și ASC ale titrurilor virale NFW pentru dihori individuali. (B) Titluri virale în trahee. (C) Titluri virale în plămâni. * indică o diferență semnificativă cu grupul vaccinat simulat (testul Mann-Whitney U).

Semne clinice ale infecției gripale la dihorii imunizați după provocare. (A) Dinamica schimbării greutății corporale în timpul fazei de provocare. (B) Suprafața sub curba modificării procentuale a greutății corporale pentru fiecare dihor. (C) Suma scorurilor pentru semnele clinice pentru fiecare dihor în cele patru zile după provocare. * Diferență semnificativă față de grupul vaccinat simulat (testul Mann-Whitney U).

Temperatura corpului dihorilor imunizați după provocare. (A) Variația temperaturii corpului în faza de provocare. Cele câteva scăderi accentuate ale temperaturii sunt rezultatul sedării în timpul provocării (D63) și al colectării fluidelor de spălare nazale. (B) Creșterea maximă a temperaturii corpului peste faza de provocare. (C) Zona sub curba deltei T în raport cu temperatura de referință pentru fiecare dihor în faza de provocare. Sunt indicate diferențele statistice cu grupul vaccinat simulat (testul Mann-Whitney U); ns = nesemnificativ.

Patologia tractului respirator superior al dihorilor imunizați la patru zile după provocare. (A) Patologie brută (GP) a turbinatelor nazale (panoul superior). Histopatologia NT (panoul mediu) și traheea (panoul inferior). (B) Procentul de țesuturi nazale afectate. (C) Analiza semicantitativă a patologiei infecției NT. H&E - hematoxilină și eozină. AB - albastru alcian. Sunt indicate diferențele statistice cu grupul vaccinat simulat (testul Mann-Whitney U); ns = nesemnificativ.

Patologia tractului respirator inferior al dihorilor imunizați la patru zile după provocare. (A) Patologia grosieră (GP) a plămânilor dihorilor (panoul superior). Histopatologia plămânilor cu diferiți coloranți (panouri medii și inferioare). (B) Procentul țesuturilor pulmonare afectate. (C) Analiza semicantitativă a patologiei infecției pulmonare. H&E - hematoxilină și eozină. P-M - pata picro-Mallory. Sunt indicate diferențele statistice cu grupul vaccinat simulat (testul Mann-Whitney U); ns = nesemnificativ.