1 Departamentul de Pediatrie, Universitatea P. J. Safarik, Facultatea de Medicină, Spitalul Facultății Copiilor, Trieda SNP 1, 040 11 Kosice, Slovacia

pleurotus

2 Departamentul de Infectologie Pediatrică, Spitalul Facultății Copiilor, Facultatea de Medicină, Trieda SNP 1, 040 11 Kosice, Slovacia

3 Institutul de Biologie Moleculară, Academia Slovacă de Științe, Dubravska Cesta 21, 845 51 Bratislava, Slovacia

4 Pneumo-Allergo Center Ltd., Udernicka 1, 851 01 Bratislava, Slovacia

5 Departamentul de Pneumologie Pediatrică și Ftiziologie, Facultatea de Medicină, Universitatea Medicală Slovacă, Institutul Național al Bolilor Copilului, Krajinska 91, 825 56 Bratislava, Slovacia

6 Departamentul de Pediatrie, Facultatea de Medicină Jessenius, Universitatea Comenius din Bratislava, Kollarova 2, 036 59 Martin, Slovacia

7 Departamentul de Pneumologie și Ftiziologie, Facultatea de Medicină Jessenius, Universitatea Comenius din Bratislava, Kollarova 2, 036 59 Martin, Slovacia

8 Departamentul de imunologie clinică și alergologie, Universitatea Comenius din Bratislava, Kollarova 2, 036 59 Martin, Slovacia

Abstract

1. Introducere

β-Glucanii sunt polimeri de glucoză derivați dintr-o varietate de surse, inclusiv drojdie, cereale, alge și ciuperci și aparțin clasei de medicamente cunoscute sub numele de modificatori ai răspunsului biologic [1]. In zilele de azi, β-glucanii au atras o atenție considerabilă datorită activităților lor antiinfecțioase, antivirale, antitumorale și imunomodulatoare, precum și a proprietăților de vindecare a rănilor [2-7]. În ceea ce privește efectul lor antiviral, β-glucanii au demonstrat o activitate excelentă împotriva unui spectru larg de virusuri vegetale, animale și umane, cum ar fi virusul necrozei hematopoietice infecțioase [8], virusul de primăvară al virusului crapului [9], virusul dengue [10], virusul herpes simplex tip 1 ( HSV-1) [11], virusul imunodeficienței umane 1 [12], virusul gripal [13, 14] și virusul mozaicului tutunului [15]. În ciuda in vitro și in vivo dovada efectului antiviral al β-glucani, până în prezent, s-au efectuat doar câteva studii clinice la om și animale β-glucani în tratamentul sau prevenirea infecțiilor virale [16-20].

Efectul antiviral al β-glucanii pot fi mediați direct prin inhibarea și/sau întreruperea particulelor de virus sau indirect prin îmbunătățirea apărării antivirale a gazdei. Mecanismul β-acțiunea glucanului este mediată prin mai mulți receptori, în special receptorul dectinei-1, receptorii asemănători (TLR 2, 4 și 6), receptorul complementului 3 (CR3), receptorul scavenger și lactosilceramida [21]. Cel mai important este receptorul dectin-1, care este extrem de exprimat în multe celule imunocompetente, cum ar fi celulele dendritice (DC), neutrofilele, eozinofilele, macrofagele, monocitele și mai multe limfocite T [22, 23].

Unul dintre agenții patogeni virali foarte răspândiți în rândul copiilor și adulților care cauzează infecția, prezentându-se clinic ca herpes labial, este virusul herpes simplex tip 1 (HSV-1). Aciclovirul, un analog nucleozidic, a fost utilizat ca regim standard pentru controlul HSV-1 prin interferența cu sinteza ADN-ului viral. Cu toate acestea, utilizarea prelungită a aciclovirului, în special la pacienții imunocompromiși, a dus la rezistență virală împotriva acestui medicament. Tulpinile HSV rezistente la aciclovir au fost izolate la 5-10% dintre pacienți și sunt asociate cu morbiditate semnificativă [24]. Mai mult, aciclovirul are o biodisponibilitate scăzută și are o gamă largă de efecte secundare, care pot limita utilizarea sa pe termen scurt și lung la copii. Prin urmare, cercetările actuale se concentrează pe dezvoltarea de medicamente naturale care sunt capabile să sporească apărarea antivirală a gazdei împotriva infecției cu HSV-1.

Ciuperci și ovăz β-prezintă glucani in vitro activitatea antiherpetică și inhibă adsorbția virală, penetrarea și răspândirea celulă-celulă [11, 25, 26] și cresc răspunsul citokinelor proinflamatorii macrofage la infecția cu HSV-1 [27]. Prin urmare, pot reprezenta potențiali agenți profilactici/de tratament în infecția cu HSV-1 și pot reduce susceptibilitatea la infecția virală după administrarea orală de β-glucani.

Scopul prezentului studiu a fost investigarea efectului clinic și imunomodulator al β-glucan pleuran (insolubil β-1,3/1,6-D-glucan izolat din Pleurotus ostreatus) pe baza suplimentelor pe durata și intensitatea simptomelor herpetice (faza de tratament acut de 10 zile a infecției cu HSV-1) și pe rata incidenței și durata simptomelor respiratorii acute și a bolilor intercurente la pacienții cu HSV-1 pozitiv (faza preventivă de 120 de zile) ).

2. Materiale și metode

2.1. Subiecte

Un studiu multicentric, randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo, a fost realizat de Departamentul de Boli Infecțioase, Spitalul Facultății Copiilor din Kosice și 6 clinici ambulatorii de pediatrie din Slovacia în perioada noiembrie 2014 - decembrie 2017.

Populația studiată a inclus 90 de pacienți cu vârsta peste 6 ani cu herpes simplex facialis/labialis într-una din primele trei etape (stadiul prodromal/furnicături, stadiul blisterului sau stadiul de plâns) la momentul vizitei de screening.

Subiecții cu antecedente de imunodeficiență primară sau secundară severă, infecție bacteriană invazivă (de exemplu, sepsis și meningită) în ultimele 14 zile și alergii sau intoleranță la produs, precum și cei care au utilizat un tratament antiviral sistemic (aciclovir, valaciclovir sau famciclovir) sau orice terapie imunomodulatoare (lizate bacteriene, β-glucani, probiotice, prebiotice, Echinacea, terapie enzimatică, pranobex cu inozină, bromură azoximeră etc.) în ultimele 28 de zile sau cele care au fost însărcinate, care alăptează și nu au putut completa cardurile jurnalului au fost excluse din studiu.

Pacienții sau părinții/tutorii lor au fost informați cu privire la desfășurarea studiului și s-a obținut consimțământul în scris al acestora.

2.2. Design de studiu

Studiul a constat din următoarele 2 faze: faza de tratament acut (primele 10 zile) și faza preventivă (120 de zile după tratamentul leziunii herpetice). Subiecții care au îndeplinit toate criteriile de includere au fost randomizați în două grupuri diferite de tratament pentru a primi oricare β-supliment pe bază de glucan sau placebo. În timpul fazei de tratament acut, subiecții din grupul activ (n = 49) li s-a administrat 1 capsulă de supliment combinat care conține pleuran 300 mg, vitamina C 160 mg și zinc 10 mg (Imunoglukan P4H® ACUTE!) În fiecare dimineață pe stomacul gol timp de 10 zile, precum și tratamentul antiherpetic recomandat (antiviral topic) medicamente, analgezice, creme de vindecare a rănilor sau plasturi pentru herpes). Grupul placebo (n = 41) a urmat același program de tratament, inclusiv produse antiherpetice, dar i sa administrat 1 capsulă care conținea doar 160 mg de vitamina C și 10 mg de zinc. Randomizarea a fost efectuată la începutul studiului, iar dezorbitarea s-a făcut după finalizarea tuturor datelor. Tratamentul activ și placebo nu au diferit în ceea ce privește forma, culoarea, gustul sau mirosul.

Un total de 77 din 90 de pacienți au fost urmăriți în timpul fazei preventive ulterioare de 120 de zile. Subiecților din grupurile active și placebo li s-a cerut să ia 1 capsulă de supliment combinat care conține 100 mg de pleuran și 100 mg de vitamina C (Imunoglukan P4H®) și placebo (100 mg de vitamina C), respectiv, în fiecare dimineață pe stomacul gol.

Substanța activă a produselor naturale administrate a fost izolată printr-o tehnologie unică și brevetată din Pleurotus ostreatus. A fost identificat anterior și caracterizat chimic de Karacsonyi și Kuniak [28].

Protocolul de studiu a urmat liniile directoare ale Declarației de la Helsinki și a fost aprobat de comitetele de etică ale spitalului facultății copiilor din Kosice și din regiunea autoguvernată Kosice.

Pacienții au suferit cinci vizite clinice pe parcursul întregii perioade de studiu: V0 (ziua 0) - vizită de screening la recrutare, V1 (ziua 10) - după 10 zile de tratament acut, V2 (ziua 40) - după 30 de zile de tratament preventiv, V3 zi 70) - după 60 de zile de tratament preventiv și V4 (ziua 130 - sfârșitul studiului) - după 120 de zile de tratament preventiv. La momentul includerii, datele antropometrice și datele privind apariția herpesului în ultimele 6 și 12 luni înainte de înscriere, precum și datele privind stadiul, localizarea, mărimea eflorescenței herpesului și terapia aplicată au fost documentate la toți subiecții.

În timpul fazei de tratament acut, subiecții studiului au menținut zilnic cărți de jurnal pe care au observat apariția, durata și intensitatea simptomelor herpesului (mâncărime, roșeață, umflături, durere, exudație, crustă, hemoragie și impact negativ asupra activităților zilnice) pe o scara analogică vizuală de la 0 (fără simptome) la 10 (cea mai mare intensitate). În zilele 0, 5 și 10, au măsurat mărimea eflorescenței herpesului. La sfârșitul fazei de tratament acut, opiniile pacienților sau ale părinților/tutorilor acestora despre efectul tratamentului (0 - fără efect; 1 - bun; 2 - foarte bun) au fost înregistrate de un medic.

În timpul fazei preventive de 120 de zile, următoarele date au fost evaluate pe baza fișelor jurnalului pacienților: incidența simptomelor respiratorii acute (rinită, tuse, dureri în gât, dureri de ureche și febră) și boli intercurente (dureri abdominale, stomatită aftoasă, herpes labial, zona zoster, erupții cutanate și infecții micotice), intensitatea lor pe scara 0 (fără simptome) la 3 (cea mai mare intensitate) și durata lor (în zile) și utilizarea antibioticelor și a altor terapii concomitente.

Pe parcursul întregului studiu, au fost înregistrate, de asemenea, tolerabilitatea produselor studiate și incidența evenimentelor adverse.

2.3. Analize statistice

Analiza statistică a fost efectuată folosind pachetul statistic pentru științele sociale (SPSS) versiunea 23.0 pentru Windows. Variabilele continue au fost exprimate ca valori medii cu medii de eroare standard (SEM), iar variabilele nominale au fost exprimate ca numere și procente. Analizele datelor au inclus testarea diferențelor în prevalență și compararea mijloacelor utilizând testul chi-pătrat (sau testul exact al lui Fisher, dacă este cazul) și testul studentului t-teste în cazuri de date continue. În toate cazurile, a P valoarea mai mică de 0,05 a fost considerată semnificativă statistic.

3. Rezultate

Un total de 90 de pacienți au fost înrolați în studiu, dintre care 87 (96,7%) au finalizat faza de tratament acut și 77 de subiecți (85,6%) au fost urmăriți în timpul fazei preventive. Trei pacienți din grupul activ au abandonat studiul în timpul fazei acute de tratament (diaree după prima doză, greață și nerespectarea protocolului de studiu). Zece pacienți (7 în grupul activ și 3 în grupul placebo) au decis să se retragă din studiu prematur după faza de tratament acut din motive personale și nerespectarea protocolului de studiu. Caracteristicile demografice sunt rezumate în Tabelul 1.

În grupul activ, o proporție mai mare de femei (32 (65,3%) vs. 21 (51,2%);

] și o vârstă medie mai mare [25,3 ± 2,3 ani față de 17,4 ± 1,5 ani;

) au fost găsite. Nu au fost observate diferențe semnificative în ceea ce privește numărul de pacienți în diferite stadii ale infecțiilor cu herpes (stadiul prodromal/furnicături, stadiul de vezicule sau stadiul de plâns) sau numărul de exacerbări ale herpesului în ultimele 6-12 luni înainte de studiu. Pacienții din grupul activ au avut o durată semnificativ mai scurtă a simptomelor herpesului, ceea ce a dus la îmbunătățirea lor timpurie, comparativ cu pacienții tratați cu placebo (11,0 ± 0,4 zile față de 12,2 ± 0,5 zile;


) în numărul de zile comparativ cu grupul placebo. Datele reprezintă media ± SEM.

Incidența efectelor secundare a fost fără diferențe semnificative între grupuri (

). În zilele 5 și 6, am observat un număr semnificativ mai mare de pacienți asimptomatici în grupul activ comparativ cu grupul placebo (13% vs. 0%; respectiv 16% vs 0%; respectiv) (Figura 2). Nu s-au găsit diferențe semnificative între grupuri în intensitatea tuturor simptomelor herpesului, în dimensiunea leziunilor herpetice la momentul inițial () și în modificarea absolută a dimensiunii herpesului în decurs de 10 zile de la tratament (


) în numărul de pacienți comparativ cu grupul placebo. Datele reprezintă valori medii.

În total, 63% dintre pacienții din grupul activ și 78% dintre pacienții din grupul placebo () au utilizat o formă de terapie concomitentă antiherpetică în timpul fazei acute. În ciuda faptului că durata herpesului a fost mai scurtă în grupul activ. Altă terapie, fără legătură cu infecțiile cu herpes, a fost utilizată de 13,0% și 12,2% dintre subiecții din grupurile active și, respectiv, placebo ().


) în numărul de zile comparativ cu grupul placebo. Datele reprezintă media ± SEM.


) în intensitatea medie a simptomelor comparativ cu grupul placebo. Datele reprezintă media ± SEM.

4. Discutie

Acesta este primul studiu clinic care studiază tratamentul potențial și efectele preventive ale unei polizaharide biologic active, pleuranul (insolubil β-glucan izolat din Pleurotus ostreatus), în gestionarea infecțiilor cu herpes simplex. Din 90 de pacienți incluși în principal în studiu, 77 de subiecți au reușit să respecte protocolul și să finalizeze studiul. La început, nu s-au observat diferențe în ceea ce privește diferitele caracteristici ale infecției cu herpes (simptome și stadii ale bolii actuale la vizita de screening și numărul de episoade labiale sau faciale de HSV în ultimele 6-12 luni) între grupurile active și placebo. Pe de altă parte, una dintre limitările studiului este legată de vârsta medie diferită din fiecare grup (Tabelul 1), ceea ce este evident din faptul că grupul activ a inclus trei pacienți cu vârsta peste 60 de ani.

Tratamentul activ cu pleuran în aplicare sistemică a determinat o durată mai scurtă a simptomelor herpes simplex comparativ cu grupul placebo. O proporție mai mare de pacienți asimptomatici a fost observată în termen de 5 zile în grupul activ. În timpul fazei preventive, durata și severitatea simptomelor respiratorii au fost mai mici în grupul activ comparativ cu grupul placebo. Nu s-au observat efecte secundare semnificative în timpul ambelor faze ale studiului clinic (acut și preventiv).

Mai multe mecanisme ar putea explica efectele anti-HSV-1 observate de la modelele murine și din concluziile din prezentul studiu. Printre cele mai importante moduri de acțiune, trebuie subliniată stimularea producției de citokine, activarea celulelor NK și a limfocitelor T și creșterea producției de oxid nitric [50-56]. Un alt mecanism important ar putea fi activarea DC-urilor, permițând prelucrarea și prezentarea mai eficientă a antigenului în condiția infecției cu HSV-1 [57].

În timpul fazei preventive, a fost confirmat și un efect pozitiv suplimentar asupra duratei și severității diferitelor simptome respiratorii. Efectul preventiv al pleurei asupra infecțiilor tractului respirator a fost confirmat în mai multe studii deschise la copii [58-61]. Într-un studiu clinic dublu-orb, controlat cu placebo, pleuranul a prezentat un efect preventiv în ceea ce privește morbiditatea respiratorie și a prezentat mai multe efecte modulatorii asupra imunității umorale și a imunității celulare [62]. Efectul său pozitiv asupra simptomelor și infecțiilor respiratorii a fost confirmat și la pacienții cu boala Crohn [63] și la sportivii de elită [64]. Într-o recenzie sistematică recentă, am evaluat efectul diferitelor β-glucani în tratamentul și prevenirea infecțiilor și simptomelor tractului respirator [65]. Efectul pozitiv al pleuranului asupra simptomelor respiratorii, durata și severitatea acestora ar putea fi explicat prin activitățile sale biologice pluripotente. Susține producerea de anticorpi, modulează imunitatea celulară specifică și are un efect pozitiv asupra activității celulelor NK [62, 64]. De asemenea, a produs un efect antiinfecțios asupra agenților patogeni selectați [28].

Infecțiile labiale recurente cu HSV-1 sunt foarte frecvente în practica zilnică și reprezintă una dintre cele mai stigmatizante afecțiuni dermatologice. Utilizarea diferitelor substanțe naturale cu modul de acțiune dezvăluit este extrem de necesară în practica clinică actuală. Conform studiului nostru, utilizarea pleuralului pare a fi o abordare promițătoare în tratamentul herpesului simplex labial acut, cu un profil de siguranță excelent și efect benefic asupra simptomelor și infecțiilor tractului respirator, care poate fi unul dintre factorii declanșatori posibili pentru labial. HSV-1 reapariție.

Disponibilitatea datelor

Datele utilizate pentru a susține concluziile acestui studiu sunt disponibile de la autorul relevant, la cerere.

Conflicte de interes

Autorii declară că nu au conflicte de interese.

Mulțumiri

Acest studiu a fost cofinanțat de proiectul Vega, 1/0310/18.

Referințe