Molecular
Medicament
Rapoarte

• Ultimii doi ani
• Total

• Anul trecut 0
• Total

• Luna trecuta
• Anul trecut
• Total

• Jianfeng Tu
• Yue Yang
• Jingzhu Zhang
• Guotao Lu
• Lu Ke
• Zhihui Tong
• Maimaitijiang Kasimu
• Dejun Hu
• Qiuran Xu
• Weiqin Li

Acest articol este menționat în:

Abstract

Introducere

Materiale și metode

Studii la pacienți

Pacienții cu T2DM (n = 110) sau PDM (n = 113) au fost recrutați între ianuarie 2016 și decembrie 2019 în Departamentul de endocrinologie și Centrul pentru pancreatită acută severă (SAP) de la Spitalul Jinling, Facultatea de Medicină a Universității Nanjing. Probele de sânge de la populații sănătoase, care sunt dificil de colectat, nu au fost incluse, deoarece scopul acestui studiu a fost de a investiga rolul chemerinei-9 în DM. Pacienții cu T2DM au fost 69 de bărbați și 41 de femei cu o vârstă medie de 48,6 ± 2,1 ani. Pacienții cu PDM au fost 82 bărbați și 31 femei cu o vârstă medie de 45,3 ± 1,8 ani. Diagnosticul T2DM sau PDM a fost verificat în conformitate cu Comitetul de experți pentru diagnosticul și clasificarea diabetului zaharat (12). Cauza principală a PDM a fost fie pancreatita acută, fie cea cronică. Pentru a evalua asocierea dintre nivelurile de chemerină și starea IR, pacienții cu T2DM sau PDM au fost împărțiți în două grupuri, cu (IR> 1) și fără (IR≤1) IR, iar probele de ser (10 ml) au fost colectate pentru ulterior Analiza ELISA. Consimțământul informat scris pentru utilizarea probelor de ser a fost obținut de la toți pacienții înscriși în acest studiu. Studiul a fost aprobat de Comitetul de Etică al Spitalului Jinling (Nanjing, China).

Test ELISA

Nivelurile serice de chemerină (ml063020 pentru șoareci, ml058526 pentru om) și glucoză serică (ml057865 pentru șoareci, ml063205 pentru om) și insulină (DCM076-8) au fost analizate folosind kitul ELISA de la Shanghai Enzyme-linked Biotechnology Co., Ltd IL-1 (SEA057Mu) și TNF-α (SEA133Mu) au fost analizate kituri ELISA de la Cloud-Clone Corp.

Studii pe animale

Tabelul I.

Compoziția dietei normale (martor) și bogată în grăsimi pentru șoarecii C57BL/6.

Tabelul I.

Compoziția dietei normale (martor) și bogată în grăsimi pentru șoarecii C57BL/6.

Pentru a evalua impactul agonistului CMKLR1, chemerin-9, asupra PDM, injecții peritoneale de soluție tampon fosfat (PBS, 200, l, grup de control, n = 8) sau chemerin-9 (4 µg în 200 µl PBS, n = 8) sau au fost efectuate în fiecare zi timp de 42 de zile, după cum s-a descris anterior (17). Probele de sânge au fost colectate în zilele 0 și 42. Protocoalele experimentale in vivo pe animale au fost aprobate de Comitetul de etică al spitalului Jinling (Nanjing, China).

Extracția ARN și transcrierea inversă-PCR cantitativă (RT-qPCR)

ARN-ul total din probele de țesut pancreatic (40 mg) a fost extras folosind reactiv TRIzol® (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.), conform protocolului producătorului. qPCR a fost efectuat ulterior utilizând amestecul SYBR Green PCR Master, inclusiv transcriptază inversă, tampon, dNTP (Applied Biosystems; Thermo Fisher Scientific, Inc.), conform protocolului producătorului. Ciclarea termică a RT-qPCR a fost stabilită ca: 95 ° C timp de 5 minute, 95 ° C timp de 10 sec și 60 ° C timp de 20 sec, repetat timp de 40 de cicluri. Grundurile au fost obținute de la compania Tiangen Biotech. Următoarele perechi de exemple au fost utilizate pentru qPCR: PDX1 înainte, 5'-GCGAGATGCTGGCAGACCTCT-3 'și invers, 5'-GGCAGACCTGGCGGTTCACAT-3'; GLUT2 înainte, 5′-CAATTTCATCATCGCCCTCT-3 ′ și invers, 5′-TGCAGCAATTTCGTCAAAAG-3 ′; și β-actină înainte, 5'-TCACTGAGGATGAGGTGGAAC-3 'și inversă, 5'-TCAGTCGCTCCAGGTCTTCACG-3'. Metoda 2-CQ a fost utilizată pentru a analiza expresia relativă a ARNm (18). β-actina a fost utilizată ca control intern de referință. Nivelurile relative ale ARNm au fost normalizate la gena de referință internă β-actină.

Colorarea H&E

Țesuturile pancreatice au fost fixate în soluție de formalină 10% timp de 24 de ore la temperatura camerei și au fost prelucrate prin prepararea histologică de țesut de rutină. Toate exemplarele au fost încorporate în ceară și secționate la 4 µm. Secțiunile au fost colorate cu hematoxilină (0,5%, 5 minute la temperatura camerei) și eozină (0,5%, 1 min la temperatura camerei) pentru examen histologic patologic.

FPG și nivelurile de insulină, glucoza postprandială și modelul homeostatic de evaluare a rezistenței la insulină (HOMA-IR)

Nivelurile de glucoză și insulină au fost măsurate la șoareci în ziua 21 și 42 după post de 16 ore. Pentru glucoza postprandială, șoarecii de post au fost injectați cu 1-1,5 mg/g de glucoză, iar probele de sânge au fost colectate după 120 de minute. Concentrațiile de glucoză și insulină serice au fost determinate folosind teste ELISA. După obținerea nivelului de glucoză și insulină în repaus alimentar, HOMA-IR a fost calculat conform următoarei formule: HOMA-IR = [glucoză în repaus alimentar (nmol/l) × insulină în repaus alimentar (µU/l)]/22,5.

analize statistice

Analizele statistice au fost efectuate folosind software-ul SPSS versiunea 22.0 (IBM Corp.) și GraphPad Prism versiunea 5.0 (GraphPad Software, Inc.). Datele cantitative sunt prezentate ca medie ± SEM cu cel puțin trei repetări independente. Semnificația statistică între grupuri a fost determinată folosind testul t Student sau ANOVA unidirecțional cu testul Tukey HSD (Diferența semnificativă sincer) post hoc. P1 a prezentat un nivel semnificativ redus de chemerină (P1 a avut un nivel semnificativ mai scăzut de chemerină în comparație cu cei cu IR ≤1 (P

figura 1.

Figura 2.

Colorare reprezentativă a hematoxilinei și eozinei țesutului pancreatic al șoarecilor C57BL/6. Șoarecii au fost injectați cu arginină intraperitoneal pentru a stabili un model PDM sau au fost hrăniți cu o dietă bogată în grăsimi pentru a induce T2DM sau control (dieta normală). Săgețile indică mărirea focală a septului interlobular și fibroza interstițială. Mărire, × 40. PDM, diabet zaharat pancreatogen.

Figura 3.

Figura 4.

Figura 5.

Figura 6.

Efectul tratamentului cu chemerin-9 asupra nivelurilor plasmatice ale chemerinei, IL-1, TNF-a, GLUT2 și PDX1 la șoarecii model PDM. Modificări ale (A) chemerinei, (B) IL-1 și (C) nivelurilor de TNF-a au fost detectate în grupele de chemerină-9 și de control după ELISA înainte și 42 de zile după tratament. Nivelurile de expresie ale (D) GLUT2 sau (E) PDX1 au fost detectate în chemerin-9 și grupurile de control prin transcripție inversă cantitativă PCR înainte și după tratament. * P Experimentele in vivo utilizând un model de șoarece de PDM au arătat că nivelurile de chemerină au scăzut în timpul dezvoltării bolii, împreună cu o creștere concomitentă a nivelurilor de IL-1 și TNF-α și au scăzut nivelurile de expresie a ARNm ale GLUT2 și PDX1. Administrarea agonistului CMKLR1, chemerin-9, a determinat o expresie crescută a chemerinei, GLUT2 și PDX1, ceea ce a condus la ameliorarea intoleranței la glucoză și a IR la șoarecii model PDM. Împreună, aceste date au indicat că chemerina poate exercita o funcție de protecție împotriva PDM, iar restaurarea căii chemerin/CMKLR1 poate reprezenta o strategie terapeutică nouă pentru tratamentul PDM.

Mulțumiri

Finanțarea

Acest studiu a fost susținut de Fundația pentru Științe Naturale din provincia Zhejiang (subvenție. Nr. LY18H150005), Fundația pentru știință și tehnologie din provincia Zhejiang (subvenție. Nr. 2013C37022) și Fundația Națională pentru Științe Naturale din China (subvenție. Nr. 81670588 și 81570584).

Disponibilitatea datelor și a materialelor

Seturile de date utilizate și/sau analizate în timpul studiului curent sunt disponibile de la autorul relevant la o cerere rezonabilă.

Contribuțiile autorilor

JT, WL și QX au proiectat studiul. YY, JZ, GL, LK și ZT au efectuat experimentele in vivo și au colectat datele. MK, DH și QX au efectuat experimentele in vivo și analiza statistică. QX și JT au scris manuscrisul.

Aprobarea eticii și consimțământul de participare

Protocolul experimental a fost aprobat de Comitetul de Etică al Spitalului Jinling (Nanjing, China). Consimțământul informat scris a fost obținut de la toți pacienții.

Consimțământul pacientului pentru publicare

Interese concurente

Autorii declară că nu au interese concurente.

Referințe

Wittamer V, Franssen JD, Vulcano M, Mirjolet JF, Le Poul E, Migeotte I, Brezillon S, Tyldesley R, Blanpain C, Detheux M și colab. Recrutarea specifică a celulelor care prezintă antigen de către chemerin, un nou ligand prelucrat de la om fluide inflamatorii. J Exp Med. 198: 977–985. 2003. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Goralski KB, McCarthy TC, Hanniman EA, Zabel BA, Butcher EC, Parlee SD, Muruganandan S și Sinal CJ: Chemerin, o nouă adipokină care reglează adipogeneza și metabolismul adipocitelor. J Biol Chem. 282: 28175–28188. 2007. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Conde J, Scotece M, Gómez R, López V, Gómez-Reino JJ, Lago F și Gualillo O: Adipokine: Biofactori din țesutul adipos alb. Un centru complex printre inflamații, metabolism și imunitate. Biofactori. 37: 413–420. 2011. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Ouchi N, Parker JL, Lugus JJ și Walsh K: Adipokine în inflamație și boli metabolice. Nat Rev Immunol. 11: 85–97. 2011. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Ernst MC și Sinal CJ: Chemerin: La răscruce de inflamație și obezitate. Tendințe endocrinol Metab. 21: 660–667. 2010. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Bondue B, Wittamer V și Parmentier M: Chemerina și receptorii săi în traficul de leucocite, inflamație și metabolism. Factorul de creștere a citokinelor Rev. 22: 331–338. 2011. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Zhang R, Liu S, Guo B, Chang L și Li Y: Chemerinul induce rezistența la insulină în cardiomiocitele de șobolan parțial prin calea de semnalizare ERK1/2. Farmacologie. 94: 259–264. 2014. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Takahashi M, Takahashi Y, Takahashi K, Zolotaryov FN, Hong KS, Kitazawa R, Iida K, Okimura Y, Kaji H, Kitazawa S și colab. FEBS Lett. 582: 573-578. 2008. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Bozaoglu K, Bolton K, McMillan J, Zimmet P, Jowett J, Collier G, Walder K și Segal D: Chemerin este o nouă adipokină asociată cu obezitatea și sindromul metabolic. Endocrinologie. 148: 4687–4694. 2007. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Yu S, Zhang Y, Li MZ, Xu H, Wang Q, Song J, Lin P, Zhang L, Liu Q, Huang QX și colab.: Chemerina și apelina sunt corelate pozitiv cu inflamația la pacienții cu diabet zaharat de tip 2 obezi. Chin Med J (Engl). 125: 3440-3444. 2012.PubMed/NCBI

Chatterjee S și Davies MJ: Diagnostic precis al diabetului zaharat și noi paradigme de clasificare. Nat Rev Endocrinol. 14: 386–387. 2018. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

American Diabetes Association: Diagnosticul și clasificarea diabetului zaharat. Îngrijirea diabetului. 33 (Supliment 1): S62 - S69. 2010. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Comitetul de experți pentru diagnosticul și clasificarea diabetului zaharat: raport al comitetului de experți pentru diagnosticul și clasificarea diabetului zaharat. Îngrijirea diabetului. 26 (Supliment 1): S5 - S20. 2003. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Ewald N, Kaufmann C, Raspe A, Kloer HU, Bretzel RG și Hardt PD: Prevalența diabetului zaharat secundar bolilor pancreatice (tip 3c). Diabet Metab Res Rev. 28: 338–342. 2012. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Ewald N și Bretzel RG: Diabet zaharat secundar bolilor pancreatice (tip 3c) - neglijăm o boală importantă? Eur J Intern Med. 24: 203–206. 2013. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Weaver C, Bishop AE și Polak JM: Modificări pancreatice provocate de administrarea cronică de exces de L-arginină. Exp Mol Pathol. 60: 71-87. 1994. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Kennedy AJ, Yang P, Read C, Kuc RE, Yang L, Taylor EJ, Taylor CW, Maguire JJ și Davenport AP: Chemerinul provoacă acțiuni constrictoare puternice prin receptorul asemănător chemokinelor 1 (CMKLR1), nu receptorului cuplat cu proteina G 1 (GPR1), în vasculatura umană și de șobolan. J Am Heart Assoc. 5 (pii): e0044212016.PubMed/NCBI

Livak KJ și Schmittgen TD: Analiza datelor privind expresia genei relative utilizând PCR cantitativă în timp real și metoda 2 (-Delta Delta C (T)). Metode. 25: 402-408. 2001. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Yang M, Yang G, Dong J, Liu Y, Zong H, Liu H, Boden G și Li L: niveluri plasmatice crescute de chemerină în diabetul zaharat de tip 2 recent diagnosticat cu hipertensiune. J Investig Med. 58: 883–886. 2010. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Pfau D, Stepan H, Kratzsch J, Verlohren M, Verlohren HJ, Drynda K, Lössner U, Blüher M, Stumvoll M și Fasshauer M: Niveluri circulante ale chemerinei adipokinei în diabetul zaharat gestațional. Pediatru Horm Res. 74: 56–61. 2010. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Hart PA, Bellin MD, Andersen DK, Bradley D, Cruz-Monserrate Z, Forsmark CE, Goodarzi MO, Habtezion A, Korc M, Kudva YC și colab.: Diabetul zaharat de tip 3c (pancreatogen) secundar pancreatitei cronice și cancerului pancreatic. Lancet Gastroenterol Hepatol. 1: 226–237. 2016. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Andersen DK: Importanța practică a recunoașterii diabetului pancreatogen sau al diabetului de tip 3c. Diabet Metab Res Rev. 28: 326-328. 2012. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Araya AV, Pavez V, Perez C, Gonzalez F, Columbo A, Aguirre A, Schiattino I și Aguillón JC: secreție TNF-alfa indusă de lipopolizaharidă (LPS), IL-1beta, IL-6 și PGE2 în sângele integral din Pacienți cu diabet zaharat de tip 1 cu sau fără parodontită agresivă. Eur Cytokine Netw. 14: 128–133. 2003. PubMed/NCBI

Saxena M, Srivastava N și Banerjee M: Asociația polimorfismelor genetice IL-6, TNF-α și IL-10 cu diabet zaharat de tip 2. Mol Biol Rep. 40: 6271–6279. 2013. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Hassani-Nezhad-Gashti F, Rysa J, Kummu O, Näpänkangas J, Buler M, Karpale M, Hukkanen J și Hakkola J: Activarea receptorului nuclear PXR afectează toleranța la glucoză și disregulează expresia GLUT2 și localizarea subcelulară în ficat. Biochem Pharmacol. 148: 253–264. 2018. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Beamish CA, Zhang L, Szlapinski SK, Strutt BJ și Hill DJ: O creștere a celulelor β imature lipsite de Glut2 precede expansiunea masei de celule β la șoarecele gravid. Plus unu. 12: e01822562017. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Khandelwal P, Sinha A, Jain V, Houghton J, Hari P și Bagga A: sindrom Fanconi și diabet neonatal: eterogenitate fenotipică la pacienții cu defecte GLUT2. Rep. Caz CEN 7: 1–4. 2018. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Rathinam A și Pari L: Myrtenal ameliorează hiperglicemia prin creșterea GLUT2 prin Akt în mușchiul scheletic și ficatul șobolanilor diabetici. Chem Biol Interact. 256: 161–166. 2016. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Wei J, Ding D, Wang T, Liu Q și Lin Y: MiR-338 controlează disfuncția secretorie a insulinei pancreatice declanșate de BPA de la compensare la decompensare prin țintirea Pdx-1. FASEB J. 31: 5184-5195. 2017. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Shi S, Zhao L și Zheng L: NSD2 este reglat în jos în T2DM și promovează proliferarea celulelor β și secreția de insulină prin reglarea transcripțională a PDX1. Mol Med Rep. 18: 3513–3520. 2018.PubMed/NCBI

Yang BT, Dayeh TA, Volkov PA, Kirkpatrick CL, Malmgren S, Jing X, Renström E, Wollheim CB, Nitert MD și Ling C: Metilare ADN crescută și expresie scăzută a PDX-1 în insulele pancreatice de la pacienții cu diabet de tip 2. Mol Endocrinol. 26: 1203–1212. 2012. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Hao T, Zhang H, Li S și Tian H: Agonistul receptorului peptidei de tip glucagon îmbunătățește funcția de rezistență la insulină a celulelor β din insulă prin activarea transducției de semnalizare PDX-1/JAK la șoarecii C57/BL6 cu dietă bogată în grăsimi diabet indus. Int J Mol Med. 39: 1029–1036. 2017. Vezi articolul: Google Scholar: PubMed/NCBI

Articole similare

Martie 2020
Volumul 21 Numărul 3

Tipăriți ISSN: 1791-2997
ISSN online: 1791-3004

• Siguranța și eficacitatea Dapagliflozinului ca monoterapie la subiecții cu diabet de tip 2 - Text integral
• PRIME PubMed Eficacitatea diferitelor alternative de tratament pentru sindromul de hipoventilație a obezității
• PRIME PubMed Efectul dietei și al postului asupra opacificării vezicii biliare în timpul administrării orale
• Eficacitate completă a nutrienților, fără text complet, pentru suplimentele alimentare pentru reducerea grăsimilor hepatice
• Hipertensiune completă gratuită cu nutrienți, programată de efectul perinatal cu conținut ridicat de grăsimi al intestinului matern