Scurt raport

  • Articol complet
  • Cifre și date
  • Referințe
  • Citații
  • Valori
  • Licențierea
  • Reimprimări și permisiuni
  • PDF

ABSTRACT

Materiale și metode

Populația de studiu

Clemă hiperinsulinemică-euglicemică

Biopsia țesutului adipos

Biopsiile abdominale subcutanate AT (SCAT) au fost colectate lateral de 6 până la 8 cm din ombilic sub anestezie locală (lidocaină 2%) prin biopsie cu ac după un post peste noapte. După spălarea imediată cu soluție salină, materialul pentru biopsie a fost congelat rapid în azot lichid și depozitat la -80 ° C până la analiza ARNm [13].

complet

Analiza ARNm a țesutului adipos

ARN-ul total a fost extras din probe de țesut cu reactiv TRIzol® (Ambion/Life Technologies; 15.596-026). Transcrierea inversă a 300 ng de ARN total a fost efectuată folosind kitul de sinteză iScript cADN (Bio-Rad; 170-8891). PCR-urile în timp real pe bază de SYBR-Green au fost efectuate folosind un iCycler Sistem de detectare iQ Real Time PCR (Bio-Rad). Reacțiile au fost efectuate într-un volum total de 25 μl conținând 5,5 μl ADNc, 12,5 μl iQ SYBR supermix verde (BIO-RAD; 1.708.882) și primeri specifici genei pentru CTSL1 (Biolegio, Forward Primer AAGTGGAAGGCGATGCACAA, Reverse Primer AAAGCCATTCATCACGGTGGCG, Reverse Primer AGCTTCAGGTCCTCGGTAAA). 18 S a fost folosit ca genă de menaj și datele au fost calculate utilizând metoda CT delta [17].

analize statistice

Publicat online:

Tabelul 1. Caracteristicile participanților

Expresia CTSB și CTSL1, compoziția corpului și sensibilitatea la insulină specifică țesutului

O corelație pozitivă semnificativă a fost observată între expresia mRNA CTSB și CTSL1 la SCAT uman (r = 0,419, p Expresia genei catepsina în țesutul adipos subcutanat abdominal al oamenilor obezi/supraponderali

Publicat online:

Tabelul 2. Coeficienții de corelație Pearson pentru expresia genei CTSB, CTSL1 și caracteristicile clinice

Publicat online:

Tabelul 3. Relația dintre expresia genei CTSB, CTSL1 în SCAT și adipozitate

Publicat online:

Tabelul 4. Relația dintre expresia genei CTSB, CTSL1 în SCAT și concentrațiile circulante de glucoză și insulină

Publicat online:

Tabelul 5. Relația dintre expresia genei CTSB, CTSL1 în SCAT și sensibilitatea la insulină specifică țesutului

În schimb, expresia CTSL1 s-a corelat pozitiv cu vârsta (r = 0,352, p = 0,002), IMC (r = 0,363, p = 0,001), WHR [r = 0,521, p 8, 18]. Expresia ridicată a CTSB ar putea contribui la creșterea lipoliza bazală și un posibil răspuns inflamator ulterior prin reducerea expresiei PLIN1 așa cum se arată în adipocitele 3T3L-1 [19]. Anterior, observațiile dintr-un studiu relativ mic (n = 9) au arătat că expresia genei CTSB este reglată în sus în SCAT la obezi comparativ cu slaba Bărbați între 21 și 35 de ani [20] În schimb, datele actuale au arătat că expresia CTSB în SCAT nu s-a corelat cu IMC sau WHR la o populație mare de vârstă mijlocie (vârsta 52 ± 2 ani).

În cele din urmă, am observat că în SCAT abdominal la bărbați și femei supraponderali/obezi, expresia CTSL1 a fost asociată pozitiv cu adipozitatea). Această constatare este în concordanță cu un studiu anterior efectuat pe șoareci induși în dietă și obezi genetic (șoareci ob/ob), care s-au caracterizat prin exprimarea și activitatea proteinei CTSL1 mai scăzute în AT alb (WAT) comparativ cu animalele de control slab, în ​​timp ce expresia ARNm de CTSL1 și pro-CTSL1 a crescut în WAT la șoareci obezi [9]. Aceste date indică o afectare a funcției lizozomale în obezitatea umană. Cu toate acestea, acest lucru trebuie investigat mai în detaliu în cercetările viitoare folosind măsurători funcționale ale activității lizozomale SCAT.

De interes, am observat o puternică corelație pozitivă între expresia CTSL1 și CTSB în SCAT uman. Cu toate acestea, inhibarea farmacologică sau eliminarea genetică a CTSL1 au indus o reglare transcripțională compensatorie și activarea enzimatică a CTSB în adipocitele 3T3 L1 murine, care a fost însoțită de o acumulare crescută de autofagozomi, care reflectă posibil disfuncția lizozomală [9]. Spre deosebire de CTSL1, expresia proteinei CTSB și activitatea sa enzimatică au fost crescute în WAT a șoarecilor obezi induși de HFD [9]. Această activare îmbunătățită a CTSB promovează clivajul CTSL, rezultând în suprimarea în continuare a activității enzimatice a CTSL, ceea ce duce la eliminarea clearance-ului autofagic și la acumularea de autofagozomi în WAT a șoarecilor obezi [18]. Prin urmare, va fi important să se stabilească dacă modificările transcripționale observate în SCAT uman se traduc și în modificări la nivel de proteine ​​și sunt însoțite de modificări ale activității CTSL1 și CTSB la bărbați și femei obezi/supraponderali.

În studiile viitoare, ar fi de interes să se investigheze și alte familii de catepsină în legătură cu disfuncția lizozomală a țesutului adipos uman. În plus, ar fi interesant să se investigheze expresia țesutului catepsină, activitatea și nivelurile plasmatice la slab în comparație cu oamenii supraponderali/obezi și să includă indivizi morbi obezi (IMC> 35 kg/m2) pentru a investiga efectele greutății corporale și ale compoziției corpului în sine. Mai mult, studiile viitoare ar trebui să investigheze, de asemenea, efectul disfuncției lizozomale asupra funcției adipocitelor umane și a metabolismului substratului folosind in vitro abordări mecaniciste și explorarea drumului de a modula funcția lizozomală a țesutului adipos uman prin intervenții nutriționale, farmacologice și de stil de viață care vizează îmbunătățirea sănătății metabolice.

Pe scurt, expresia CTSL1 în SCAT uman este asociată pozitiv cu adipozitatea, în timp ce expresia CTSB SCAT este invers legată de rezistența la insulină a întregului corp. Împreună, aceste date sugerează că disfuncția lizozomală, reflectată de creșterea CTSL1 și de scăderea expresiei CTSB, este prezentă în SCAT a bărbaților și femeilor supraponderale/obeze și se poate referi la afectarea homoeostaziei glucozei la nivelul întregului corp. Cu toate acestea, datele noastre sunt de natură corelațională și sunt necesare cercetări suplimentare pentru a determina cauzalitatea acestor asociații.

Tabelul 1. Caracteristicile participanților

Datele sunt medii ± SD [Interval: min-max]; IMC: indicele de masă corporală, WHR: raportul talie-șold, HOMA-IR: evaluarea modelului homoeostatic pentru rezistența la insulină, HbA1 C: hemoglobina A1 C, FFA: acizi grași liberi, EGP: producția endogenă de glucoză, Rd: rata de dispariție.