Subiecte similare ale lucrării științifice în medicina clinică, autor al unui articol științific - Hülya Güngel, Asiye Nurten, İhsan Kara, Serife Evrim Kepekci Tekkeli, Elif Özkök și colab.

Lucrare de cercetare academică pe tema „Efectele Enoant și ischemiei și reperfuziei asupra metaboliților lentilelor șobolanilor”

Hindawi Publishing Corporation ISRN Analytical Chemistry Volume 2013, ID articol 964601, 7 pagini http://dx.doi.org/10.1155/2013/964601

reperfuziei

Efectele Enoant și ischemiei și reperfuziei asupra metaboliților lentilelor șobolanilor

Hulya Gungel, 1 Asiye Nurten, 2 ihsan Kara, 3 Serife Evrim Kepekci Tekkeli, 4 Elif Ozkok, 3 și Bur ^ in Yildiz5

1 Spitalul de Instruire și Cercetare din Istanbul, Clinica de Oftalmologie, Fatih, 34098 Istanbul, Turcia

2 Departamentul de Fiziologie, Facultatea de Medicină, Universitatea Yeni YUzyil, Topkapi, Istanbul, Turcia

3 Universitatea din Istanbul, Departamentul de Neuroștiințe, Institutul de Medicină Experimentală, Istanbul, Turcia

4 Departamentul de chimie analitică, Facultatea de Farmacie, Universitatea Bezmialem Vakif, Fatih, 34093 Istanbul, Turcia

5 Facultatea de Inginerie și Științe Naturale, Universitatea Sabanci, Tuzla, Istanbul, Turcia

Corespondența trebuie adresată lui Serife Evrim Kepekci Tekkeli; [email protected]

Primit la 3 iulie 2013; Acceptat la 29 iulie 2013

Redactori academici: A. Garcia Asuero și C. Y. Panicker

Au fost investigate efectele ischemiei și reperfuziei asupra metaboliților cristalinului și efectul unui produs comercial fitoterapeutic numit „Enoant” (conținut mixt de polifenoli) asupra metaboliților cristalinului selectați. În acest scop, 30 de șobolani Wistar au fost împărțiți în trei grupe în funcție de dieta lor și au fost supuși ischemiei. 10 dintre șobolani ca grupa I au fost hrăniți cu dietă uscată; celelalte 10 (grupa II) au fost hrănite cu dietă uscată și apă potabilă cu Enoant. La sfârșitul perioadei de 15 zile, ambele grupuri de șobolani au fost supuse ischemiei timp de 2 ore și reperfuzate. După alte 15 zile cu aceeași dietă, șobolanii au fost decapitați. Restul de 10 șobolani, care nu au fost supuși ischemiei (grupa III), au fost hrăniți doar cu dietă uscată. 'Spectroscopia HNMR a fost utilizată pentru determinarea metaboliților lentilelor pentru fiecare grup de oferte. Rezultatele obținute din cele trei grupuri au fost comparate statistic. Diferențele de metaboliți au fost semnificative, cu excepția piruvatului și succinatului. Administrarea orală a Enoant a evidențiat efecte asupra creșterii stabilizării membranei, capacității antioxidante, capacității moleculei regulatoare osmotice și conținutului de sorbitol al cristalinului perturbat de ischemie. Enoant poate fi utilizat acolo unde se formează stres oxidativ sau osmotic.

Ca necesitate a vieții, aparițiile oxidative din celule determină formarea speciilor reactive de oxigen (ROS) și sunt neutralizate în cristalin prin mijloace enzimatice sau neenzimatice [1-3]. Insuficiențele din sistemele antioxidante induc producerea mai multor proteine ​​inflamatorii care contribuie la procesul celulelor care favorizează deteriorarea lipidelor, ADN-ului, carbohidraților și proteinelor.

ROS sau radicalii liberi de oxigen stimulează dezvoltarea cataractei. Există un număr mare de articole publicate legate de antioxidanți care inhibă dezvoltarea cataractei [4]. Plantele bogate conțin flavone care adsorb radicalii liberi de oxigen și au caracteristici antiinflamatorii și conțin, de asemenea, proantocianină și alți compuși polifenolici. S-a raportat că proantocianina inhibă peroxidarea lipidelor, agregarea trombocitelor și permeabilitatea capilară și

fragilitate și pentru a modula enzima sistemelor incluzând ciclooxigenaza și lipoxigenaza [5, 6]. Acestea pot preveni citotoxicitatea și peroxidarea lipidelor mediate de radicalii liberi și protejează lipoproteinele cu densitate mică de oxidare [7]. Semințele de struguri, sucul de struguri și vinul sunt bogate în acești compuși polifeno-lic. S-a demonstrat recent că resveratrolul, quercetina și catehina au activitate împotriva stresului oxidativ. Flavonele sub formă de materie pură au fost cunoscute ca având apoptoză și efectul opririi îmbătrânirii asupra țesutului viu [8]. S-a demonstrat că flavonolii au ca efect scăderea sorbitolului și creșterea adenozin trifosfatului (ATP) asupra șobolanilor diabetici. Flavonolii efectuează acest efect prin inhibarea aldozei reductazei care transformă glucoza în sorbitol folosind fosfat de nicotinamidă adenină dinucleotidă (NADPH) ca cofactor. Aldoz reductaza (RA) are un rol atât în ​​dezvoltarea cataractei, cât și în patogeneza complicațiilor neuropatice, nefropatice și retinopatice.

[9-11]. Inhibitorii de aldoză reductază (ARI) au fost studiați in vivo pentru a clarifica eficacitatea lor în prevenirea complicațiilor diabetice la animalele experimentale [12]. În plus, printre șobolanii cărora li s-a făcut diabet cu streptozotocină, s-a demonstrat că, deși vinul roșu reduce glucoza, hemoglobina glicată (HbAlC) și fructoza din sânge, crește nivelul de insulină din sânge [13]. Efectele polifenolilor au fost variate în funcție de concentrația și sinergia din extractele de struguri. Antioxidanții fenolici care transportă grupări carboxil și hidroxil au afectat sinergia cu alți polifenoli. Aceste grupuri, într-o astfel de stare, determină o reducere a capacității de adsorbție a moleculelor de oxigen liber; în plus, cauzând necroza celulară, acestea pot avea, de asemenea, o creștere a numărului de radicali liberi de oxigen [14].

Metaboliții lentilei și corneei au fost studiați prin intermediul spectroscopiei prin rezonanță magnetică nucleară (RMN) încă din anii 1980. Datorită ușurinței aplicabilității lor, extractele de acid percloric au fost studiate până în ultimii ani pentru a defini metaboliții. În ultimii ani, RMN a fost utilizată mai mult, în special în țesuturile tumorale, pentru a urmări efectul stimulărilor apoptotice [15-18]. Markerul cel mai frecvent studiat al deteriorării țesutului oxidativ este substanța reactivă tiobarbiturică (TBARS), iar markerul cel mai frecvent marcat în măsurarea capacității antioxidante este glutationul reductiv (GSH). Ne-am propus să cercetăm efectul asupra metaboliților cristalinului cauzat de aplicarea ischemiei/reperfuziei (I/R) și efectul asupra metaboliților cristalinului selectați cauzat de un produs comercial numit „Enoant”, cunoscut pentru a avea caracteristici antioxidante ridicate din cauza conținutul mixt de polifenoli și introdus ca aditiv dietetic și concentrat standardizat de extract de vin fără alcool.

2. Material și metode

2.1. Investigarea extractelor de vin concentrat. Enoant a fost furnizat cu amabilitate de Te-ha Cosmetic Company (Istanbul, Turcia). Conținutul de polifenoli din Enoant, extras din piele și semințe de struguri, a fost determinat prin cromatografie lichidă de înaltă presiune (HPLC) ca 1,47 mg/ml pisică-echină, 0,88 mg/ml epicatechină, 130 mg/ml quercetină și 23 mg/ml resveratrol [19].

2.2. Investigarea lentilelor. Pregătirea animalelor a fost după cum urmează: toate studiile la animale sunt efectuate în conformitate cu directivele Comisiei Europene pentru mediu (86/609/CEE). Șobolani masculi Wistar albini (n = 30) cu o greutate de 200-250 g au fost folosiți în acest experiment. Animalele au fost găzduite 3-4 șobolani pe cuști de laborator și menținute pe un ciclu de 12 ore lumină-întuneric, cu acces ad libitum la condițiile standard de laborator timp de cel puțin 1 săptămână înainte de experiment. Zece dintre aceștia au fost numiți ca grupa I, care au fost hrăniți cu diete uscate. Ceilalți 10 șobolani (grupa II) pe lângă dieta lor au primit Enoant pe cale orală în apă proaspătă de băut (1,25 g/kg/zi) timp de 15 zile. La sfârșitul perioadei de 15 zile, carotidele bilaterale ale șobolanilor au fost legate timp de 2 ore și s-a format ischemie. Apoi, au fost refuzate la sfârșitul perioadei de 2 ore. Restul de 10 șobolani și-au continuat doar dieta uscată (Grupa III). Acești șobolani, care țineau diete timp de 15 zile, au fost sacrificați

cu aplicarea tiopentalului peritoneal (100 mg/kg). Lentilele celor 3 șobolani din fiecare grup au fost înghețate pentru a prepara extract de acid percloric. TBARS a fost menținut la una dintre lentilele fiecăruia dintre cei 7 șobolani rămași, iar GSH reductiv a fost menținut la celelalte lentile. Spectrele: HNMR ale celor 3 șobolani au fost preluate în extracte de acid percloric.

2.3. Pregătirea și analiza extractelor de acid percloric. Lentilele înghețate au fost pulverizate cu un mortar de porțelan și un pistil răcit cu azot lichid. S-a adăugat acid percloric (300 ^ L 10%) la pulbere de țesut și pulberea a fost agitată continuu până la consistența pastei congelate.

Proba congelată a fost imediat centrifugată la 3000 g timp de 10 minute la temperatura camerei. Supernatantul a fost neutralizat cu hidroxid de potasiu 0,1 M la valori de pH de 7,0-7,2. Proba a fost apoi centrifugată la 3000 g timp de 10 minute la temperatura camerei și supernatantul final a fost colectat [20].

Supernatanții preparați au fost uscați sub vid și au fost rezolvați în 0,3 ml oxid de deuteriu (D20). Spectrele 1HNMR au fost obținute cu un spectrometru Varian Unity Inova 500 (11,7 T) care funcționează la 500 MHz pentru protoni.

În plus, un număr mare de vârfuri suprapuse care aparțin glucozei, fructozei și sorbitolului în spațiul cuprins între 3,00 și 5,00 ppm. De aceea, tripletul din spațiul dintre 3,71 și 3,74 ppm pentru sorbitol a fost luat ca referință. În plus, în literatură, tripletul a fost de 3,73

se pare că a crescut în lipsa sorbitol dehidroge-nazei [31]. Integralele relative ale vârfurilor de referință ale metaboliților selectați în spațiul cuprins între 0,5 și 5,00 ppm au fost luate luând în considerare apa, deoarece apa a fost introdusă fix în preparatul 1HNMR din grupele I, II și III. Și rezultatele integrale relative medii dintre fiecare 3 grupuri au fost comparate statistic.

2.4. Măsurarea nivelurilor de lentile GSH. S-a adăugat o soluție de deproteinază (120 g NaCI, 6,68 g acid m-fosforic și 0,8 g EDTA) la omogenizat tisular 10% al cristalinului. Proteinele precipitate au fost îndepărtate prin centrifugare. La supernatant s-au adăugat fosfat disodic 0,6 M și acid 5,5'-ditio-bis-2-nitrobenzoic (DTNB), iar probele au fost măsurate la 412 nm în 5 minute. Rezultatele au fost exprimate ca ^ moL/g țesut [32].

2.5. Măsurarea nivelurilor de lentile TBARS. 10% omogenizat de lentile au fost preparate cu 0,15 M KCL. 50 ^ L 8,1% dodecil sulfat de sodiu, 50 ^ L acid acetic (ajustat la pH 3,5) și 100 ^ L reactivi de acid tiobarbituric (TBA) au fost adăugați la 50 ^ L omogenat. Amestecul de reacție a fost menținut într-o baie de apă clocotită timp de 45 de minute. După răcire la temperatura camerei, TBA a fost extrasă cu n-butanol/piridină (15: 1). Probele au fost măsurate la 535 nm. Rezultatele au fost calculate ca țesut nmoL/g [33].

2.6. Statistici. Integralele relative ale metaboliților lentilei selectați și nivelurile GSH și nivelurile de oxidare a lipidelor (TBARS) la șobolanii Wistar care au prezentat I/R (grupa I și II) și grupul de control (grupa III) au fost comparate statistic între grupurile I și II între Grupa II și III. Efectul I/R asupra metaboliților lentilei și efectul lui Enoant asupra modificărilor din Grupul I și Grupul II și Grupul II din Grupul III au fost comparate statistic și discutate în literatura de specialitate. Diferențele dintre mediile de densitate ale metaboliților au fost comparate prin testul „Mann Whitney U”. Datele au fost exprimate ca medie ± SD. P