• Despre PNR
  • Bord editorial
  • Jurnal Statistici
  • Informații jurnal
  • Următorul
  • Problemă actuală
  • Arhiva
  • NRP activat
  • NRP activat
  • Cele mai citite
  • Cele mai citate
  • Liniile directoare pentru autori
  • Trimiterea electronică
  • Contactează-ne
  • Taxe de prelucrare a articolelor
  • Număr special
  • Căutare text integral

nutrițională

Acesta este un articol cu ​​acces liber distribuit în condițiile licenței non-comerciale de atribuire Creative Commons (http://creativecommons.org/licenses/by- nc/3.0 /) care permite utilizarea, distribuția și reproducerea necomercială fără restricții în orice suport, cu condiția ca lucrarea originală să fie citată în mod corespunzător.

Consumul de alimente bogate în colesterol, precum ouăle, are un efect minim asupra nivelului de colesterol circulant la oamenii sănătoși. Pentru a obține o perspectivă, am investigat dacă fosfolipidele bogate în ouă (EPL) interferează cu absorbția colesterolului intestinal in vivo.

Pentru a investiga efectul acut al EPL asupra absorbției colesterolului intestinal, șoarecii masculi C57BL/6J au fost administrați oral cu 6, 11 sau 19 mg de EPL timp de trei zile. De asemenea, am testat efectul consumului cronic de EPL asupra metabolismului colesterolului în intestinul subțire și ficatul la șoareci cu hipercolesterolemie indusă de dietă. Șoarecii masculi C57BL/6J au fost hrăniți cu o dietă bogată în grăsimi/colesterol ridicat (HF/HC; 35% grăsimi, 0,25% colesterol, g/g) timp de 4 săptămâni pentru a induce hipercolesterolemie, iar ulterior șoarecii au fost hrăniți cu 0, 0,4 sau 0,8 % (g/g) de EPL timp de 6 săptămâni.

Absorbția colesterolului intestinal a fost semnificativ redusă cu cea mai mare doză de administrare acută de EPL comparativ cu martorul. Suplimentarea cronică cu EPL nu a modificat semnificativ absorbția colesterolului intestinal și nici nivelurile plasmatice ale colesterolului total și ale colesterolului lipoproteic cu densitate mică. În intestinul subțire și ficat, suplimentarea cu EPL a modificat minim expresia genelor care reglează nivelul colesterolului celular.

Deși consumul cronic de EPL nu a reușit să contracareze hipercolesterolemia la șoarecii hrăniți cu HF/HC, administrarea acută de EPL a scăzut absorbția colesterolului intestinal. Acest studiu oferă in vivo dovezi că administrarea acută de PL în ouă împiedică absorbția colesterolului în intestin, sugerând un mecanism pentru un efect minim al consumului de ouă asupra nivelului de colesterol circulant.

Boala cardiovasculară (BCV) este principala cauză de mortalitate la nivel mondial, reprezentând

31% din decesele globale în 2012, potrivit Organizației Mondiale a Sănătății [1]. Ateroscleroza, o afecțiune caracterizată prin acumularea de plăci încărcate cu lipide în vasul de sânge, este unul dintre principalii factori care contribuie la patogeneza BCV [2]. Concentrațiile mari de colesterol seric total (TC) și colesterolul lipoproteic cu densitate mică (LDL-C) facilitează dezvoltarea aterosclerozei [3]. Consumul de alimente care conțin cantități mari de colesterol, cum ar fi ouăle și produsele de origine animală, a fost limitat până la menținerea concentrațiilor serice normale de TC și LDL-C până de curând. Liniile directoare dietetice naționale din 2015-2020 au eliminat recomandarea care limitează consumul zilnic de colesterol la 300 mg din cauza lipsei de dovezi care susțin o relație pozitivă între aportul de colesterol din dietă și hipercolesterolemia la om [4, 5, 6, 7].

Hrănirea și îngrijirea animalelor

Administrarea acută de EPL

Șoarecii masculi C57BL/6J (The Jackson Laboratory, Bar Harber, ME, SUA), pe o dietă obișnuită de chow, au fost distrași cu doze zilnice crescânde, adică 6, 11 și 19 mg/șoarece (n = 5, 5 și 8, respectiv), de EPL timp de 3 zile consecutive. EPL (pulbere de L-α-fosfatidilcolină) a fost achiziționată de la Avanti Polar Lipids (Alabaster, AL, SUA). Probele de fecale au fost recoltate la 24 de ore după ultimul gavaj EPL pentru a determina absorbția colesterolului intestinal așa cum este descris mai jos.

Consumul cronic de EPL

Pentru a investiga efectul consumului cronic de EPL asupra metabolismului colesterolului, șoarecii masculi C57BL/6J la vârsta de 11 săptămâni au fost hrăniți cu o dietă modificată AIN-93M cu conținut ridicat de grăsimi/colesterol ridicat (HF/HC; 35% grăsimi, 0,25% colesterol, g/g) timp de 4 săptămâni pentru a induce hipercolesterolemie. Ulterior, șoarecii au fost hrăniți cu o dietă de control HF/HC sau cu o HF/HC suplimentată cu 0,4% sau 0,8% EPL (n = 8 și respectiv 10) în greutate (HF/HC-EPL) timp de 6 săptămâni. Compoziția detaliată a dietei este descrisă în Tabelul 1. Greutatea corporală a șoarecilor și consumul de alimente au fost înregistrate săptămânal. Absorbția colesterolului intestinal a fost determinată la 5 săptămâni după ce șoarecii au fost hrăniți cu dietele experimentale așa cum este descris mai jos. După 6 săptămâni în dietele experimentale, șoarecii au fost anesteziați cu ketamină-HCI (110 mg/kg)/xilazină (10 mg/kg) (Henry Schein Animal Health, Dublin, OH, SUA) după 8 ore de post, și apoi eutanasiați prin puncție cardiacă și luxația cervicală ulterioară. Probele de sânge de șoarece au fost incubate la temperatura camerei timp de 30 de minute și apoi centrifugate la 1.500 × g la 4 ℃ timp de 15 minute pentru a îndepărta celulele roșii din sânge. Probele de ficat și intestin subțire au fost colectate, cântărite, congelate rapid și depozitate la -80 ℃ până la utilizare.

Dozele de EPL au fost determinate pe baza normalizării suprafeței corpului la un individ uman de 70 kg [21]. Dozele EPL de 6, 11 și 19 mg/șoarece pentru gavaj oral sunt echivalente cu 0,8, 1,5 și 2,5 ouă la om. Suplimentele alimentare de EPL la 0,4% și 0,8% (g/g) sunt echivalente cu consumul zilnic de

3 ouă, respectiv, la om. Toți șoarecii au fost menținuți sub ciclul de 12 ore de lumină/12 ore de întuneric, cu acces gratuit la alimente și apă. Toate procedurile au fost aprobate de Comitetul instituțional de îngrijire și utilizare a animalelor din cadrul Universității din Connecticut (protocolul nr. A13-026).

Analiza ratei de absorbție a colesterolului intestinal

Administrarea acută de EPL

Pentru evaluarea efectului acut al EPL asupra absorbției colesterolului intestinal, șoarecii au fost gavați zilnic numai cu 30 µL de ulei vegetal sau cu una din cele 3 doze de EPL (6, 11 sau 19 mg per șoarece) timp de 3 zile, așa cum s-a descris anterior [ 22]. Pentru a determina rata de absorbție a colesterolului intestinal, am folosit colesterol marcat cu 14 C cu sitosterol marcat cu 3 H, care servește ca un control neabsorbabil. În prima zi, șoarecii au fost administrați cu 0,1 uCi de colesterol [14 C] și 0,14 uCi de [3H] sitosterol (American Radiolabeled Chemicals, St. Louis, MO, SUA) la 30 de minute după golirea EPL. Probele de fecale au fost colectate la 24 de ore după ultima zi de gavaj EPL. Lipidele fecale au fost extrase folosind metoda Folch așa cum s-a descris anterior [23, 24], iar raportul dintre [14 C] colesterol și [3 H] sitosterol în lipidele fecale au fost calculate pentru a determina ratele de absorbție a colesterolului intestinal.

Consumul cronic de EPL

Pentru studiul cronic, șoarecii hrăniți fie cu control HF/HC, fie cu HF/HC-EPL au fost gavați cu 0,09 µCi de colesterol [14 C] și 0,13 µCi de [3 H] sitosterol timp de 2 zile consecutive după 5 săptămâni de diete experimentale iar probele de fecale au fost colectate la 5 zile după prima creștere a colesterolului [14 C] și a [3 H] sitosterolului. Absorbția fracțională a colesterolului intestinal a fost determinată prin metoda izotopului fecal dual, utilizată în studiul acut.

Concentrațiile circulante de TC și trigliceride (TG) au fost măsurate enzimatic folosind kitul L-Type TG M (Wako, Richmond, VA, SUA) și setul de reactivi pentru colesterol (Pointe Scientific, Canton, MI, SUA), respectiv, așa cum am descris anterior [ 25]. Concentrațiile plasmatice ale colesterolului cu lipoproteine ​​cu densitate ridicată (HDL-C) au fost măsurate utilizând reactivul de colesterol setat după precipitarea lipoproteinelor conținând apoB folosind setul de reactivi de precipitare a colesterolului HDL (Pointe Scientific, Canton, MI, SUA).

Analiza expresiei genei utilizând transcriere inversă PCR cantitativă în timp real (RT-qPCR)

ARN-ul total din ficat și intestin a fost extras așa cum s-a descris anterior [25]. Expresia genelor implicate în transportul, sinteza și absorbția colesterolului a fost determinată de RT-qPCR așa cum am descris anterior folosind procedura SYBR Green [25]. Gliceraldehidă 3-fosfat dehidrogenază (Gapdh) a fost utilizată ca genă de referință pentru normalizarea datelor.

T-test nepereche a fost efectuat de GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, La Jolla, CA, SUA) pentru a identifica diferențele semnificative statistic între grupuri. P Masa 2).

Efectul consumului acut și cronic de EPL asupra absorbției colesterolului intestinal

Nu au existat diferențe semnificative în absorbția colesterolului intestinal atunci când șoarecii au consumat acut EPL la doze de 6 sau 11 mg comparativ cu martorul (Tabelul 3). Cu toate acestea, 19 mg de EPL au scăzut semnificativ absorbția colesterolului intestinal în comparație cu martorul (P = 0,01). Cu toate acestea, consumul de 0,4% EPL timp de 6 săptămâni nu a modificat semnificativ absorbția colesterolului intestinal la șoarecii hipercolesterolemici.

Efectul consumului de EPL cronic asupra expresiei genelor intestinale și hepatice

În intestinul subțire, abundența ARNm de Niemann-Pick C1-Like 1 (Npc1l1), un transportor major de colesterol, a fost redus semnificativ cu 0,8%, dar nu cu 0,4% consumul de EPL. Cu toate acestea, oricare dintre dozele de EPL nu a modificat semnificativ nivelurile de ARNm de Hmgcr, Ldlr, Abca1, și Abcg5.

Concentrațiile plasmatice ridicate de TC și LDL-C sunt principalii factori de risc ai BCV [26]. Prin urmare, colesterolul din dietă a fost văzut istoric ca o componentă dietetică care a crescut riscul de BCV [27], iar American Heart Association a stabilit o recomandare dietetică pentru a limita consumul de colesterol din dietă la mai puțin de 300 mg/zi în 1968 [28]. În ghidul dietetic din 2015, recomandarea a fost eliminată pe baza dovezilor crescânde că colesterolul din dietă nu crește incidentele de boli de inimă [5, 27, 29, 30]. Cu toate acestea, mecanismele care stau la baza observării nu au fost clar elucidate. Inhibarea absorbției colesterolului intestinal afectează în mare măsură concentrațiile plasmatice ale TC [31], iar PL dietetic din diferite surse, inclusiv gălbenuș de ou, soia și lapte, s-a sugerat că inhibă absorbția colesterolului intestinal [16, 20]. Prin urmare, am căutat să determinăm dacă consumul acut sau cronic de EPL, reprezentând

28% din totalul lipidelor din ouă în greutate [2], pot inhiba absorbția colesterolului intestinal. În studiul de față, am constatat că administrarea acută de EPL la o doză echivalentă cu 2,5 ouă la om a redus semnificativ absorbția colesterolului intestinal la șoareci, în timp ce consumul cronic de EPL echivalent cu 1,5 ouă la om nu a putut modifica absorbția colesterolului intestinal la șoarecii hipercolesterolemici. Această acțiune inhibitoare a EPL asupra absorbției colesterolului intestinal explică, cel puțin parțial, observațiile din mai multe studii care arată că consumul de ouă nu a crescut concentrațiile plasmatice de TC la oameni sănătoși, în ciuda aportului zilnic ridicat de colesterol din dietă din ouă [11, 12].

Un alt mecanism posibil pentru acțiunea inhibitoare a EPL asupra absorbției colesterolului este acela că EPL poate împiedica hidroliza PL micelare de către fosfolipaza A2 (PLA2), inhibând astfel absorbția colesterolului micelar de către enterocit. Studiile au demonstrat că PLA2 este crucial pentru absorbția colesterolului în enterocite prin scăderea conținutului micelar de PL. Studiile au arătat că FPL 67047XX, un inhibitor al PLA2, a scăzut absorbția colesterolului in vitro și in vivo. În celulele Caco-2, inhibitorul PLA2 a abolit o creștere dependentă de PLA2 a captării colesterolului celular din micele [35]. În mod similar, infuzia de duoden cu emulsie lipidică care conține inhibitorul PLA2 a redus semnificativ absorbția colesterolului la șobolani [36]. Prin urmare, este de presupus că creșterea conținutului de PL micelare datorită consumului de EPL poate inhiba absorbția colesterolului intestinal prin impedanța acțiunii PLA2. Sunt necesare studii suplimentare pentru a determina dacă îmbogățirea micelelor cu EPL determină acțiune inhibitoare împotriva capacității de legare a micelelor de SR-B1 și absorbția celulară dependentă de PLA2 a colesterolului pentru a inhiba absorbția colesterolului intestinal.

În concluzie, acest studiu demonstrează că administrarea orală acută de EPL inhibă absorbția intestinală a colesterolului la șoarecii hrăniți cu un chow normal, în timp ce consumul cronic de EPL cu o dietă HF/HC nu a modificat nivelul plasmatic al TC și absorbția colesterolului intestinal la șoarecii hipercolesterolemici. Au fost sugerate mai multe mecanisme pentru a demonstra acțiunea inhibitoare a EPL asupra absorbției colesterolului în intestin, cu toate acestea, sunt necesare mai multe cercetări pentru a elucida posibilele mecanisme prin care EPL inhibă absorbția colesterolului intestinal la nivelul întregului corp și al celulelor. În ciuda efectului benefic al EPL asupra absorbției colesterolului, preocupările privind consumul de EPL rămân, deoarece EPL oferă un substrat pentru trimetilamină N-Oxid (TMAO) și marker CVD [2]. Miller și colab. [37] a demonstrat că consumul de ouă crește nivelul postprandial al TMAO plasmatic la om. Prin urmare, studii suplimentare sunt justificate pentru a investiga efectul consumului cronic de EPL asupra formării TMAO și a contribuției sale la BCV.

Cu toate acestea, studiul nostru oferă in vivo dovezi că administrarea EPL inhibă absorbția intestinală a colesterolului. Important, această observație demonstrează, pentru prima dată, că știm că consumul de PL în ouă previne absorbția colesterolului intestinal, ceea ce oferă o explicație de ce consumul de ouă bogate în colesterol nu exercită efecte hipercolesterolemice în majoritatea populației umane.