Se înțelege din ce în ce mai mult că asocierea dintre obezitate și osteoartrită (OA) este mediată parțial de un efect inflamator sistemic al adipokinelor, cum ar fi leptina (LEP), adiponectina (ADIPO) și rezistina. Asocierea obezității și OA a articulațiilor care nu suportă greutate, cum ar fi mâna, susține în continuare această ipoteză 1,2. S-a sugerat că LEP și rezistina au un efect proinflamator puternic 3,4, în timp ce rolul ADIPO într-o articulație a genunchiului este neclar, întrucât unele au demonstrat un efect antiinflamator 5, iar altele sugerează un efect proinflamator 6. În mod similar, receptorii ADIPO au fost identificați numai în articulația genunchiului 6 .

obezitate

Niciun studiu nu a examinat relația epidemiologică dintre obezitate și OA a umărului și nici nu a identificat acești hormoni ai obezității în articulația umărului. Obiectivul studiului nostru a fost de a determina dacă adipokinele LEP, ADIPO și rezistina sunt prezente în lichidul sinovial al umărului (SF) al pacienților cu OA și de a examina relațiile acestor hormoni cu măsurile habitusului corporal.

Am recrutat pacienți care așteptau repararea electro-rotativă a manșetei rotatorilor sau intervenția chirurgicală de înlocuire a umărului pentru a participa, între 2009 și 2011. Am exclus pacienții cu antecedente de intervenții chirurgicale anterioare pe umăr, injecție anterioară cu steroizi, artrită posttraumatică sau antecedente de artropatie inflamatorie. Pacienții supuși unei intervenții chirurgicale de înlocuire a umărului pentru un diagnostic de OA au fost folosiți ca sursă pentru condrocite articulare. Protocolul de studiu a fost aprobat de Comitetul de revizuire a subiectului uman.

Au fost colectate date demografice, inclusiv indicele de masă corporală (IMC) și circumferința taliei (WC). Cohorta noastră de studiu a avut cel puțin o suprafață condrală cu daune de gradul 3 sau gradul 4, astfel cum este determinat de clasificarea Outerbridge 7 .

Probele de sânge SF și venos au fost colectate și depozitate la -80 ° C; s-au adăugat inhibitori de protează, în momentul intervenției chirurgicale pe umeri, în condiții sterile. Kituri Milliplex ™ MAP (Millipore, Natick, MA, SUA) au fost utilizate pentru a detecta nivelurile în triplicat de adipokine relevante și citokine inflamatorii. Toate probele au fost citite pe cititorul BioPlex 200.

Caracteristicile de performanță pentru imunoanalize au fost determinate cu coeficientul de variație intra-test pentru fiecare analit.

Izolarea condrocitelor

Cartilajul a fost plasat imediat în mediul de transport și păstrat la 4 ° C până la procesare. Pe scurt, cartilajul a fost spălat în soluție salină tamponată cu fosfat și transferat într-un vas de cultură care conține DMEM suplimentat cu 10% ser fetal bovin (FBS) și hialuronidază. Probele au fost incubate la 37 ° C peste noapte și a doua zi au fost filtrate, centrifugate, resuspendate, numărate și placate.

Cultură de celule

Celulele HepG2 ale ficatului uman, celulele HEK293 ale rinichiului embrionar uman, fibroblastul șoarecelui C3H10T1/2 și celulele ATDC5 precondrocitice ale șoarecilor au fost cultivate în DMEM suplimentat cu 10% FBS. Celulele ATDC5 și C3H10T1/2 au fost induse să se diferențieze în celule condrocitare prin adăugarea de insulină și, respectiv, BMP2. Probele au fost trecute printr-un ac și apoi centrifugate. Supernatanții au fost colectați și s-a determinat concentrația de proteine.

Analiza Western blot

Probele au fost prelevate pe geluri SDS-poliacrilamidă și pete au fost testate cu anticorpi direcționați împotriva AdipoR1, AdipoR2 și ObRb.

Microscopie de imunofluorescență

Condrocitele au fost cultivate în vase Falcon cu 12 godeuri pe lamele de sticlă de 18 mm acoperite cu 25 μg/ml poli-L-lizină. Celulele au fost fixate și permeabilizate și apoi incubate în ser albuminic bovin 1%, apoi lăsate peste noapte la 4 ° C cu AdipoR1, AdipoR2, ObRb, colagen 11, actină sarcomerică sau colagen 1 anticorpi primari. Toate imaginile de fluorescență au fost achiziționate folosind un microscop de fluorescență Leica DMI 6000B.

Datele continue au fost comparate între grupuri cu testul Kruskal-Wallis, în timp ce corelațiile au fost determinate utilizând coeficienți nonparametrici de Spearman.

Au fost construite modele de regresie liniară separate pentru a evalua relația dintre habitusul corporal (IMC și WC) și cele 3 variabile dependente: niveluri de SF LEP, SF ADIPO și SF rezistină. Modelele au fost apoi ajustate în funcție de vârstă și sex.

Pentru acest studiu a fost aleasă o dimensiune a eșantionului de 35 de pacienți, anticipând 4 variabile independente în modelul de regresie, permițând astfel> 8 rezultate pe covariabil. Toate analizele statistice au fost efectuate cu SPSS Versiunea 13.0 (SPSS, Chicago, IL, SUA).

În eșantionul nostru de 35 de pacienți, au existat 15 bărbați (43%), cu vârsta medie de 63,0 ani (SD 10,1) și IMC mediu de 28,3 kg/m 2 (SD 5,4).

Exprimarea receptorilor de adiponectină și leptină în cartilajul umărului. Lizatele celulare totale extrase din condrocitele cartilajului umărului, liniile celulare hepatice umane (HepG2) și renale embrionare (HEK293) au fost rulate pe geluri de denaturare și cuantificate prin Western blot. Au fost încărcate diferite cantități de lizați celulari: (A) 2 μg, (B) 5 μg și (C) 10 μg pentru receptorul de tip 1 al adiponectinei; și (D1) 10 μg, (D2) 30 μg și (D3) 100 μg pentru receptorii de adiponectină tip 2 și leptină.