Parametrii fiziologici ai șoarecilor AS +/+ și AS -/-. Răspunsul șoarecilor AS +/+ (bare deschise) și AS -/- (bare umplute) la alimentarea de 48 de ore a controlului (0,8% K +), 2% K +, 3% K + și 5% K + . Șoarecii sunt păstrați în cuști metabolice pentru a înregistra aportul de alimente (A), greutatea corporală (B), aportul de apă (C), volumul de urină (D), plasma [K +] (E), plasma [Na +] (F), excreția urinară K + (G), Na + excreția urinară (H), rapoarte de urină 24 de ore [K +]/[creatinină] (I) și rapoarte de urină 24 ore [Na +]/[creatinină] (J). Modificările aportului alimentar și ale greutății corporale au fost înregistrate pe întreaga perioadă de 48 de ore de hrănire și au fost exprimate ca diferență (() în greutatea alimentară și corporală a șoarecilor în ultimele 48 de ore înainte de experiment. Lichidul urinar și excreția ionică sunt raportate în ultimele 24 de ore. Concentrațiile ionilor din sânge au fost măsurate la sfârșitul experimentului de hrănire. n = 5-7 șoareci per grup. Valorile sunt media ± SEM. * P≤0,05; ** P≤0,01; *** P≤0.001.

renal

Exprimarea și distribuția subcelulară a ROMK în rinichii șoarecilor AS +/+ și AS -/- păstrați o dietă de 2% K + timp de 48 de ore. (A) Detectarea canalelor ROMK glicozilate complet și nematurate (benzi de 55 kDa și respectiv 42 kDa) prin imunoblotare utilizând fracții totale de membrană ale omogenatului de rinichi întreg. Membrana este reprobată pentru β-actină. n = 5 șoareci per grup. (B) Detectarea canalelor ROMK în DCT și CNT prin imunofluorescență pe criosecțiile renale. Tubulii sunt identificați prin costarea calbindinei D28K (neprezentată) așa cum este descris în metodele concise. Bară, aproximativ 25 μm.

Exprimarea și localizarea subcelulară a subunităților ENaC în rinichii șoarecilor AS +/+ și AS -/- păstrați o dietă de 2% K + timp de 48 de ore. (A) Detectarea subunităților α-ENaC, β-ENaC și γ-ENaC prin imunoblotare utilizând fracții totale de membrană ale omogenatului de rinichi întreg. Toate membranele sunt reprobate pentru β-actină și datele sunt normalizate împotriva β-actinei. Graficele cu bare reprezintă date densitometrice. n = 5 șoareci per grup. Valorile sunt media ± SEM. * P≤0,05. (B) Detectarea subunităților α-ENaC, β-ENaC și γ-ENaC în CNT și CD corticale prin imunofluorescență pe criosecțiile renale. Tubulii sunt identificați prin costarea calbindinei D28K (neprezentată) așa cum este descris în metodele concise. Bară, aproximativ 25 μm.

Efectul inhibiției AT1R de către losartan asupra consumului de alimente, K + plasmatic, K + excreție urinară, clearance-ul creatininei și distribuția subcelulară a β-ENaC și ROMK la șoarecii AS +/+ și AS -/- păstrați o dietă de 2% K + timp de 48 de ore. (A) Aportul alimentar, raportul de urină [K +]/[creatinină], concentrațiile de K + din sânge, clearance-ul creatininei la șoareci la 13 ore după tratamentul cu vehicul (Veh) sau losartan (Los). Vehiculul și losartanul se injectează subcutanat la 36 de ore după începerea experimentului de hrănire. Aportul alimentar și excreția ionică urinară sunt înregistrate pentru următoarele 13 ore. n = 5 în grupul losartan; n = 4 în grupul de vehicule. Valorile sunt media ± SEM. * P≤0,05; ** P≤0,01. (B) Detectarea β-ENaC și ROMK la sfârșitul DCT și CNT la șoareci cu AS-deficienți tratați cu vehicul și losartan prin imunofluorescență pe criosecțiile renale. Tubulii sunt identificați prin costarea calbindinei D28K (neprezentată) așa cum este descris în metodele concise. Bară, aproximativ 25 μm.

Transcrierea, expresia, fosforilarea și activitatea NCC sensibil la tiazidă în rinichii șoarecilor AS +/+ și AS -/- păstrați o dietă de 2% K + timp de 48 de ore. (A) Nivelurile de ARNm NCC sunt evaluate prin RT-PCR în timp real. n = 7 șoareci per grup. (B) Detectarea NCC total și NCC fosforilat la treonină 53 (pT53 NCC), treonină 58 (pT58 NCC) și serină 89 (pS89 NCC) prin imunoblotare folosind fracții totale de membrană ale omogenatului de rinichi întreg. Datele sunt normalizate împotriva β-actinei. Graficele cu bare reprezintă date densitometrice. n = 5 șoareci per grup. (C) Diferența (Δ) în raporturile de urină [Na +]/[creatinină] și [K +]/[creatinină] între șoarecii injectați cu vehicul (DMSO) și șoarecii injectați cu hidroclorotiazidă (HCTZ). Vehiculul și HCTZ au fost injectate intraperitoneal la 48 de ore după începerea experimentului de hrănire. Urina este colectată pentru următoarele 4 ore. n = 8-9 pentru fiecare grup. Valorile sunt media ± SEM. * P≤0,05; ** P≤0,01.

Activitatea canalului Na + și K + în colonul distal. (A) Experimentele de cameră de tip folosire sunt folosite pentru a înregistra curenții canalului K + bariu (Ba +) -sensibil în mucoasele colonice izolate de șoareci AS +/+ și AS -/- după hrănirea fie a unui control, fie a unui K + 2% dieta timp de 48 de ore. (B) Diferența sensibilă la bariu a curenților ionici este calculată și reprezentată grafic cu bare. (C) Înregistrarea curenților canalului de Na + amiloridă (Amil) sensibili la mucoasele colonului distal de la șoarecii AS +/+ și AS -/- păstrați fie pe o dietă de control, fie pe o dietă de 2% K + timp de 48 de ore. (D) Diferențele sensibile la amiloride ale curenților ionici sunt calculate și reprezentate grafic cu bare. n = 5-6 șoareci pe dietă și genotip. Concentrațiile luminale sunt de 5 mM pentru BaCl2 și 100 μM pentru amilorid. Valorile sunt media ± SEM. * P≤0,05.