Masahiro TAKAHASHI

1) Departamentul de patobiologie avansată, Școala de absolvire a științelor vieții și mediului, Universitatea Prefecturii Osaka, 1–58 Rinku-oraikita, Izumisano, Osaka 598–8531, Japonia

îmbunătățirea

Kumiko SAWADA

2) Laboratorul Nippon Formula Feed MFG Co., Ltd., 4-2 Higashifukashiba, Kamisu-shi, Ibaraki 314-0103, Japonia

Noritoshi KAWATE

1) Departamentul de patobiologie avansată, Școala de absolvire a științelor vieții și mediului, Universitatea Prefecturii Osaka, 1–58 Rinku-oraikita, Izumisano, Osaka 598–8531, Japonia

Toshio INABA

1) Departamentul de patobiologie avansată, Școala de absolvire a științelor vieții și mediului, Universitatea Prefecturii Osaka, 1–58 Rinku-oraikita, Izumisano, Osaka 598–8531, Japonia

Hiromichi TAMADA

1) Departamentul de patobiologie avansată, Școala de absolvire a științelor vieții și mediului, Universitatea Prefecturii Osaka, 1–58 Rinku-oraikita, Izumisano, Osaka 598–8531, Japonia

ABSTRACT

Inducerea ovulațiilor multiple și transferul de embrioni (ET) la bovine sunt tehnici importante care permit producerea unui număr crescut de viței excelenți din ovocite produse de baraje superioare folosind semințele de boi care au genotipuri excelente. Cu toate acestea, calitatea ovocitelor și a embrionilor după tratamentul superovulator este semnificativ afectată de starea nutrițională a vacilor donatoare, de tehnicile de gestionare a hranei și de calitatea furajelor.

Bilanțul energetic postpartum afectează performanța reproductivă a vacilor donatoare. Un echilibru energetic negativ cauzează probleme de reproducere, cum ar fi reducerea frecvenței pulsului LH, interferența cu maturizarea foliculului și ovulația întârziată [5]. Modificările endocrine asociate cu echilibrul energetic și alăptarea [5, 27] și efectele localizate ale metaboliților în fluidul folicular [14] pot compromite calitatea ovocitelor și embrionilor și competența de dezvoltare la vacile de lapte. Cu toate acestea, mecanismele exacte ale acestor efecte rămân neclare și nu se știe pe deplin modul în care starea nutrițională a vacii negre japoneze donatoare influențează calitatea ovocitelor și a embrionilor și rata de sarcină după ET.

Suplimentarea cu grăsime influențează reproducerea prin afectarea dimensiunii foliculului dominant, scurtarea intervalului până la prima ovulație postpartum la bovine, creșterea concentrației de progesteron în timpul fazei luteale, modularea sintezei prostaglandinelor uterine și îmbunătățirea calității ovocitelor și a embrionilor și a competenței de dezvoltare [20]. Unele dintre aceste efecte sunt modificate de tipul de acid gras hrănit. Acizi grași polinesaturați de bypass galben (PUFA) ai n-6 (acid linoleic, C18: 2) și n-3 [acid α-linolenic, C18: 3; acid eicosapentaenoic (EPA), C20: 5; familiile cu acid docosahexaenoic (DHA), C22: 6] au efecte remarcabile asupra reproducerii la bovine [20], dar nu se știe dacă aceste efecte sunt mediate doar de acești acizi grași sau de alți potențiali intermediari produși în timpul biohidrogenării rumenului.

Suplimentarea cu grăsime de by-pass a crescut rata de concepție până la primul serviciu, dar nu a afectat semnificativ ratele de sarcină la sfârșitul sezonului de reproducere la vacile de lapte [16]. Suplimentarea cu o sursă bogată de acizi grași n-3 a scăzut calitatea embrionilor de la vacile de lapte donatoare care alăptează, comparativ cu suplimentarea cu săruri de calciu a uleiului de palmier, dar nu a avut niciun efect asupra ratei ulterioare de sarcină a junincilor primitoare care au primit embrioni congelati de gradul 1. a vacilor de lapte donatoare [18]. O dietă cu semințe solare bogate în acid linoleic nu a avut niciun efect asupra numărului de ovule și embrioni sau asupra numărului de embrioni transferabili la vacile de lapte [25]. Grăsimea suplimentară de bypass galben alimentată la junincile de carne de vită primipare nu și-a îmbunătățit fertilitatea în sezonul de reproducere [8].

Așa cum s-a menționat mai sus, nu au existat multe cercetări cu privire la efectele suplimentării cu grăsimi asupra fertilității. Hrănirea cu acizi grași nesaturați (UFA) a îmbunătățit calitatea și dezvoltarea embrionilor la vacile de lapte Holstein [7, 25]. Cu toate acestea, nu există rapoarte privind ovulația multiplă și ET după administrarea UFA la vacile negre japoneze. Aici am investigat efectele hrănirii PUFA la vacile negre japoneze asupra biochimiei sângelui, numărul total de ovule și embrioni și numărul de embrioni transferabili recuperați după tratamentul superovulator și ratele de sarcină după ET.

MATERIALE ȘI METODE

Testele de biochimie a sângelui: în grupurile experimentale și de control, sângele a fost colectat din vena sau artera cozii în prima zi de administrare a hormonului foliculostimulant (FSH), iar serul a fost separat prin centrifugare. Testele biochimice ale sângelui au fost efectuate cu un autoanalizator SPOTCHEM EZ SP-4430 (Arkray Co., Ltd., Kyoto, Japonia) după recuperarea embrionului. Au fost determinate concentrațiile serice de glucoză (Glu), colesterol total (T-Cho), azot uree din sânge (BUN), aspartat amino transferază (AST), proteine ​​totale (T-Pro) și albumină (Alb). Concentrațiile serice de β-caroten au fost analizate așa cum s-a descris anterior [21] după o denaturare într-o etapă și extracție în solvent organic utilizând sistemul de testare iEx ™ și un fotometru portabil (iCheck ™; BioAnalyt GmbH, Teltow Germany). Analiza a constat din trei etape simple: injecție, reacție și măsurare în câteva minute. Eficiența extracției a fost> 95%. Coeficienții de variație intra și interanaliză au fost în medie de 7,4 și respectiv 8,3%.

Transferul de embrioni și diagnosticul de sarcină: Majoritatea beneficiarilor au fost folosiți pentru ET după observarea estului în picioare, iar restul de destinatari au fost utilizați pentru sincronizarea estului cu 0,5 mg de analog PGF2α. ET au fost efectuate în zilele 6 - 8 (ziua 0 = debutul estrului). Destinatarii au fost juninci Holstein cu corpul galben (CL) având un diametru palpabil mai mare de 12 mm și o consistență fermă sau moderată fermă prin palpare rectală. Embrionii transferabili au fost selectați la întâmplare, iar etapele dezvoltării embrionilor transferabili nu au fost înclinați între cele trei grupuri. Embrionii proaspeți au fost transferați în cornul uterin ipsilateral în ovarul care poartă CL. Embrionii congelați-decongelați fără a dilua EG în crioprotectoare au fost transferați în același mod. Un embrion per recipient a fost transferat nechirurgical cu o seringă ET având o teacă de 3 mm diametru și o cameră superficială (IMV Technologies). Sarcina după ET a fost diagnosticată prin palpare rectală în ziua 60 după estrus.

Probele de sânge au fost colectate de la donatori în prima zi de tratament superovulator. Valorile sunt mijloace ± SD ale donatorilor. a, b) Valorile cu superscripturi diferite în același rând indică diferențe semnificative (Tabelul 2. Embrionii transferabili au fost recuperați de la 90,0% (45/50) din vacile experimentale și 84,0% (42/50) din vacile de control relația dintre zilele de hrănire a suplimentului PUFA bypass și numărul de ovule și embrioni este prezentată în tabelul 2. Numărul total de ovule și embrioni pe vacă în grupul de hrănire de 15 până la 19 zile (14,9 ± 8,9) a fost semnificativ mai mare decât cei din grupul de control (10,0 ± 7,6) Numărul de embrioni transferabili pe vacă a fost semnificativ mai mare în grupul de hrănire de 15 până la 19 zile (7,8 ± 6,0) decât în ​​grupul de control (4,5 ± 3,9). grupul care a alimentat suplimentul PUFA de bypass timp de 15 până la 19 zile a fost semnificativ mai mare decât în ​​grupul de control, dar nu a fost diferit de cei din grupul de hrănire de 10 până la 14 zile. Numărul de embrioni transferabili din grupul care a alimentat suplimentul PUFA timp de 15 până la 19 zile a fost semnificativ mai mare decât cea n cei din grupul de hrănire de 10-14 zile și grupul de control.

masa 2.

Grupul nr. de vaci donatoare Nu. de ovule și embrioni pe vacă Nr. de embrioni transferabili pe vacă *
Control5010,0 ± 7,6 a) 4,5 ± 3,9 a)
Experiment
10 până la 14 zile de hrănire1510,1 ± 9,0 a, b) 4,1 ± 3,9 a)
15 până la 19 zile de hrănire3514,9 ± 8,9 b) 7,8 ± 6,0 b)

Embrionii au fost colectați la 7 zile după estrus. * Morula la blastocist expandat cu codul 1 sau 2. Valorile sunt mijloace ± SD ale donatorilor. a, b) Valorile cu superscripturi diferite în aceeași coloană sunt semnificativ diferite (P Tabelul 3. Rata sarcinii în grupul experimental (66,7%) a fost semnificativ mai mare decât cea din grupul de control (51,1%) după transferul de Rata de sarcină în grupul experimental (57,1%) a fost semnificativ mai mare decât în ​​grupul de control (44,0%) după transferul embrionilor congelați-decongelați.

Tabelul 3.

Grup de vaci donatoare Rata de sarcină după transferul fiecărui tip de embrioni Embrioni proaspeți embrioni decongelați
Control51,1% (46/90) a) 44,0% (59/134) a)
Experiment66,7% (46/69) b) 57,1% (72/126) b)

Rata sarcinii: nu. a femeilor însărcinate/nr. de destinatari. a, b) Valorile cu supercripturi diferite în cadrul aceleiași coloane sunt semnificativ diferite (P Adamiak SJ, Powell K., Rooke JA, Webb R., Sinclair KD 2006. Compoziția corpului, carbohidrații dietetici și acizii grași determină dezvoltarea post-fertilizare de ovocite in vitro bovine Reproducere 131: 247–258 doi: 10.1530/rep.1.00871 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]