Programe de cercetare Nemours și

Programe de cercetare Nemours și

Divizia de endocrinologie, Departamentul de cercetare, Clinica pentru copii Nemours, Jacksonville, Florida 32207

Abstract

obezitatea cauzează și/sau agravează multe probleme de sănătate, atât independent, cât și în asociere cu alte boli. În special, sa raportat că este asociat cu dezvoltarea bolilor cardiovasculare (BCV) (11, 12, 23, 30). Se crede că factorii care predispun indivizii la BCV se dezvoltă în timpul copilăriei (4, 5). Pe lângă faptul că este o proteină reactantă în fază acută, fibrinogenul joacă un rol important în promovarea aterogenezei și a trombogenezei. Studii recente au demonstrat că concentrația plasmatică crescută de fibrinogen este un factor de risc independent pentru BCV (8, 22,24, 40). Concentrațiile plasmatice de fibrinogen au fost chiar mai puternic asociate cu moartea cardiovasculară decât colesterolul plasmatic (29). Mai multe studii anterioare au arătat în mod clar concentrații plasmatice de fibrinogen în diabetul necontrolat, bolile vasculare și obezitatea (11, 30); cu toate acestea, mecanismele care reglează nivelurile de fibrinogen plasmatic in vivo în aceste condiții sunt slab înțelese.

Există mai multe căi prin care creșterea acută sau cronică a nivelurilor de fibrinogen poate duce la evenimente aterosclerotice și cardiovasculare. Acestea includ infiltrarea peretelui vasului de către fibrinogen, efecte reologice datorate creșterii vâscozității sângelui, creșterea agregării plachetare și a formării trombului și creșterea formării fibrinei. Într-o meta-analiză recentă (13), o serie de factori precum fumatul țigării, echilibrul energetic pozitiv, diabetul zaharat, obezitatea, sarcina, aportul ridicat de grăsimi din dietă, creșterea vârstei, menopauză, inflamație, trombină și leziuni vasculare au fost toate identificat pentru a afecta concentrațiile plasmatice de fibrinogen. Determinanții genetici și de mediu sunt alți factori importanți care contribuie la modificările concentrațiilor plasmatice ale fibrinogenului (22,35). Concentrația fibrinogenului plasmatic reprezintă un dezechilibru între producția (sinteza) și rata de eliminare (descompunere) a acestei proteine. Deși în prezent nu există o metodă viabilă pentru măsurarea defalcării fibrinogenului la om, capacitatea de a măsura modificările ratei de sinteză a acestei proteine ​​ar putea oferi o perspectivă asupra mecanismelor care reglementează acest factor de risc pentru BCV.

Materiale

l - [1-13 C] leucina [99% exces de atom la sută (APE)] a fost cumpărată de la Cambridge Isotope Laboratories. O mulțime de izotopi stabili achiziționați au fost testați pentru puritate chimică, izotopică și optică prin cromatografie de gaze-spectrometrie de masă (GC-MS). Soluțiile de izotopi sterili și fără bacterii au fost trecute printr-un filtru de 0,22 μm și depozitate în recipiente sterile, sigilate de 30 kg/m2) și șase infecții sănătoase cu control slab pentru adolescente (vârstă> 15 ani -1 -1 h -1) de l - [1-13 C] leucina timp de 4 ore, s-au recoltat probe de sânge și respirație la fiecare 20 de minute de la 180 de minute în continuare.

Tabelul 1. Caracteristici fizice și clinice

GroupLeanObeseP Valoaren66 Vârstă, an16,4 ± 0,416,6 ± 0,5NSÎnălțime, cm159,7 ± 2,2164,2 ± 2,8NSIMC, kg/m 2 20,8 ± 0,736,6 ± 1,8 2). Procentul de masă grasă (% FM) a fost măsurat utilizând suma grosimii a patru pliuri ale pielii luate cu etriere (βTechnology, Cambridge, MA). Concentrația de fibrinogen a fost determinată imunologic prin nefelometrie automată a ratei laserului. Concentrațiile de albumină serică au fost măsurate colorimetric prin metoda verde bromocrezol cu ​​un kit de la Sigma Diagnostics (St. Louis, MO). Acizii grași liberi (FFA) au fost de asemenea măsurați prin metode colorimetrice cu un kit de la Sigma Diagnostics. Glucoza plasmatică a fost măsurată printr-o metodă de glucoză oxidază cu un analizor de glucoză Beckman (Beckman Instruments, Palo Alto, CA). Concentrațiile de insulină plasmatică au fost măsurate de RIA la Laboratoarele de Științe Endocrine (Calabases Hills, CA).

Proceduri analitice

Îmbogățirea bazei de precursori.

Îmbogățirea plasmatică a β- [13 C] cetoisocaproatului ([13 C] KIC), un indice de îmbogățire intracelulară a leucinei, a fost determinată de GC-MS cu monitorizarea ionilor selectați și ionizarea impactului electronic al unui t-derivat de butildimetilsilil, așa cum s-a descris anterior (27, 38).

Purificarea fibrinogenului și măsurarea îmbogățirilor [13 C] cu leucină.

Determinarea îmbogățirii [13 C] a leucinei în fibrinogen plasmatic purificat.

Am folosit tehnica GC-Com-IRMS așa cum s-a descris anterior (2) pentru măsurarea îmbogățirii [13 C] cu leucina a fibrinogenului (15). Leucina derivată din hidroliza fibrinogenului a fost derivatizată ca fiindN-ester metilic heptafluorobutiril, separat pe o coloană GC și ars într-un cuptor online (800-900 ° C). CO2 rezultat din procesul de ardere a fost ulterior analizat pentru raportul său de izotop de 13 CO2 la 12 CO2 cu un IRMS online (2).

Calcule

FSR (exprimat în%/24 h) de fibrinogen plasmatic a fost calculat prin împărțirea pantei de regresie a îmbogățirii izotopilor de la 180 la 240 min de perfuzie de izotopi cu îmbogățirea platoului plasmatic de [13 C] KIC în funcție de relația precursor-produs

Subiecte: Caracteristici fizice și clinice

Tabelul 1 prezintă caracteristicile fizice și clinice ale subiecților studiați. Fiecare grup, obez și control slab, a fost format din șase fete adolescente potrivite pentru vârstă. Prin proiectare, subiecții obezi aveau un IMC semnificativ mai mare (IMC> 35 kg/m 2; interval 34,1-44,4 kg/m 2) decât martorii slabi (IMC 2; interval 19,4-22,9 kg/m 2). Mai mult, înălțimea a fost similară între grupuri. Valorile% FM și a masei fără grăsimi (FFM) au fost mai mari în grupul obez (P 13 C] KIC a fost folosit ca îmbogățire a grupului de precursori (Fig.1A) pentru calcularea FSR a fibrinogenului.

fibrinogenului

FIG. 1.A: îmbogățirea medie a cetoisocaproatului de plasmă [13 C] ([13 C] KIC) în grupurile obeze și slabe la 180, 200, 220 și 240 min. B: pante liniare de 13 C îmbogățire a fibrinogenului plasmatic în grupurile obeze și slabe. ⧫, valorile medii ale îmbogățirii cu 13 C [exces în atomi% (APE)] la 180, 200, 220 și 240 min în grupul obez; ●, valorile corespunzătoare din grupul slab.

Figura 2A prezintă valorile FSR ale fibrinogenului în grupurile obeze și slabe. FSR al fibrinogenului din grupul de control, 17,02 ± 1,43%/zi (interval între 12 și 21%/zi) pe baza calculului cu CCI plasmatică ca grup de precursori, a fost mai mic decât cel raportat (~ 28%/zi) la adulții tineri (16), dar aproape de cel raportat de Hunter et al. (21). Valoarea medie a FSR a fibrinogenului la subiecții obezi, 35,06 ± 2,61%/zi (interval 22-44%/zi), a fost aproape dublă față de grupul de control slab. FSR al fibrinogenului a arătat o corelație semnificativă statistic între IMC (r = 0,79; P = 0,002) și concentrația plasmatică a fibrinogenuluir = 0,74; P = 0,009) la subiecții pe care i-am studiat (Fig. 3, A șiB).

FIG. 2.A: rata de sinteză fracționată (FSR) a fibrinogenului în grupurile slabe și obeze. FSR al fibrinogenului din grupul obez a fost aproape dublu față de cel din grupul slab. B: rata de sinteză absolută (ASR) a fibrinogenului în grupurile slabe și obeze. * P


FIG. 3.A: relația dintre FSR a fibrinogenului și indicele de masă corporală (IMC, kg/m 2); B: relația dintre fibrinogenul FSR și concentrația plasmatică a fibrinogenului (g/l). Fibrinogenul FSR a fost semnificativ corelat cu IMC și concentrația plasmatică de fibrinogen.