Glicație timpurie și avansată în plasma sanguină umană. Principalele căi de formare a produsului final de glicație avansată (AGE): autoxidarea monozaharidică (calea Wolff), autoxidarea aldiminelor (calea Namiki), calea poliolului, autoxidarea produselor Amadori (calea Hodge) și calea neoxidativă.

text

Prezentare generală a fluxului de lucru experimental.

Spectrele de masă tandem dobândite la m/z 673,66 (A) și 463,56 (B) corespunzătoare ionilor [M + 3H] 3+ ai peptidelor, EQLKAmAVMoxDDFAAFVEK și FKAmDLGEENFK (ambele ser albuminic uman). Spectrele au fost achiziționate cu spectrometrul de masă LTQ-Orbitrap Velos Pro operat în modul ion pozitiv ca parte a fluxului de lucru RP-HPLC-Orbitrap-LIT-MS/MS DDA. Inserturile reprezintă cromatograme ionice extrase (m/z ± 0,02) achiziționate pentru m/z 673,66 (A) și 463,56 (B). KAm și MOx denotă reziduuri de lizil glicat și respectiv de metionil oxidat.

Spectre de masă tandem dobândite la m/z 673,66 (A) și 463,56 (B) corespunzătoare ionilor [M + 3H] 3+ ai peptidelor, EQLKAmAVMoxDDFAAFVEK și FKAmDLGEENFK (ambii ser albumină umană). Spectrele au fost achiziționate cu spectrometrul de masă LTQ-Orbitrap Velos Pro operat în modul ion pozitiv ca parte a fluxului de lucru RP-HPLC-Orbitrap-LIT-MS/MS DDA. Inserturile reprezintă cromatograme ionice extrase (m/z ± 0,02) achiziționate pentru m/z 673,66 (A) și 463,56 (B). KAm și MOx denotă reziduuri de lizil glicat și respectiv de metionil oxidat.

Rezultatele analizei componente principale (PCA) efectuate pentru grupurile de pacienți T2DM (diamante deschise) și normoglicemice (cercuri închise). Analiza s-a bazat pe toate cele 42 de peptide glicate diferențial și a indicat o separare clară între grupuri.

Valorile variabilei de răspuns a analizei discriminante liniare (LDA) reprezentate grafic pentru indivizii T2DM (diamante deschise) și de control (cercuri închise), calculate folosind seturi de variabile predictive selectate (așa cum este rezumat în Tabelul 3). (A) Estimat prin validare încrucișată de tip „leave-one-out”; (B) estimat din eșantioane originale, cu LDA instruit pe eșantioane generate.

Zonele de vârf ale semnalelor la 38,7 min (A) și 48,9 min (B), integrate în cromatogramele ionice extrase (XIC) de m/z 698,56 ± 0,02 (A) și 691,09 ± 0,02 (B), corespunzătoare M + 4H] 4+ ioni de peptide glicate LVNEVTEFAKAmTCCAMVADESAENCCAMDK (albumina serică umană, A) și respectiv QNCCAMELFEQLGEYKAmFQNALLVR (albumina serică umană, B). Datele au fost obținute în experimentele RP-HPLC-QqTOF-MS efectuate cu digestii triptice îmbogățite cu cromatografie de afinitate cu acid boronic (BAC) obținute din probe individuale de T2DM și probe de plasmă de control. Semnificația statistică a fost estimată prin testul U al lui Mann-Whitney, iar valorile p sub 0,05 au fost considerate semnificative. KAm și CCAM denotă reziduuri de lizil glicați și, respectiv, carbamidometilate de cisteinil.