Figurile și datele articolelor

Cifre

Șoarecii Af17 -/- hrăniți cu dieta normală cu Na + au prezentat afectarea funcției renale și scăderea TA, în ciuda creșterii ușoare a aldo plasmatic. Șoarecii Af17 +/+ (n = 34) și Af17 -/- (n = 37) au fost analizați șoarecii hrăniți cu dieta normală de Na + în cuști metabolice pentru parametrii indicați. Pentru măsurarea TA, n = 57 șoareci pentru Af17 +/+ și n = 65 șoareci pentru Af17 -/-. Pentru toți ceilalți parametri, n = 6 până la 37 șoareci/grup. Pentru parametri suplimentari, consultați Figura suplimentară S1. În toate cazurile, * P + /+ .

deficitul

Afectarea și restabilirea activității ENaC la șoarecii Af17 -/-. (A) Urme curente reprezentative din patch-uri atașate la celule care monitorizează activitatea ENaC în condițiile indicate. Liniile punctate indică starea curentă respectivă cu un c care indică starea închisă. (B - D) Grafic rezumat al ENaC Po (B), canalele active într-un patch (C) și activitatea ENaC eficientă (D). În toate cazurile, * P + /+ .

Af17 reglează expresia ARNm și proteine ​​a ENaC. (A) RT-qPCR în timp real pentru exprimarea genelor ENaC în rinichi de șoareci hrăniți cu dieta normală cu Na +, cu β-actină ca control intern. n = 3 șoareci/grup. (B) Western blots pentru exprimarea proteinelor așa cum este indicat, cu β-actină ca control intern. Pentru αENaC, banda de aproximativ 30 kD a fost exclusă în analizele de date. me2K79 și me2K9: histona H3 dimetilată K79 și respectiv K9. n = 4 șoareci/grup. În toate cazurile, * P + /+ .

Af17 este exprimat în nefron distal aldo-sensibil. (A și B) Secțiunile rinichiului Af17 -/- au fost colorate cu X-gal și un anticorp împotriva markerului celular principal Aqp2. Regiunile în cutie din A și B au fost amplificate în C și, respectiv, D. Vârfurile de săgeată indică celulele care exprimă aparent Aqp2 și β-geo reporter condus de promotorul Af17.

Ștergerea Af17 determină hipermetilare H3 K79 la promotorul αENaC din rinichi. (A) Diagrama promotorului αENaC. Testul ChIP 12 –14 (B și C) care arată H3me2K79 crescut asociat cu R0-R3, dar nu cu subregiunea Ra a promotorului αENaC. Cromatina la rinichi a fost preparată din patru șoareci WT și patru șoareci mutanți, grupată în două grupe în funcție de genotip și analizată prin ChIP cu anticorpii indicați și urmată de qPCR în timp real cu primeri care amplifică subregiunile promotorului αENaC așa cum se arată în A. Abundența H3me2K79 a fost setată la 1 în R0 de la rinichii WT și a fost calculată corespunzător pentru toate celelalte probe. * P +/+. n = 4 șoareci/grup (B). Au fost prezentate analize reprezentative de gel de agaroză ale produselor qPCR finale pentru a verifica specificitatea qPCR pentru fiecare probă (C).

Perfuzia Aldo a compensat în mare măsură pierderea funcției Af17 în fiziologia renală. Volumul de urină de 24 de ore, excreția electrolitului urinar și TA au fost examinate înainte (ziua 0) și după perfuzia aldo, după cum sa indicat. n = 10 până la 11 șoareci/genotip. Bara întunecată: Af17 +/+. Bara gri: Af17 -/-. Pentru parametri suplimentari, consultați Figura suplimentară S2. În toate cazurile, * P + /+ .

Șoarecii Af17 -/- și Af17 +/+ prezintă fiziologie renală similară și TA într-o manieră dependentă de timp pe dieta scăzută de Na +. Șoarecii Af17 +/+ (linie continuă sau bară întunecată) și Af17 -/- (linie punctată sau bară gri) au fost hrăniți cu o dietă scăzută de Na + (0,02% Na +) în cuști metabolice și analizați pentru parametrii anteriori (ziua 0) și după tratament în diferite momente de timp, așa cum este indicat. Pentru măsurarea TA, n = 17 - 21 șoareci/grup. Pentru toți ceilalți parametri, n = 4 până la 14 pentru șoareci Af17 +/+ și n = 6 până la 14 pentru șoareci Af17 -/-. Pentru parametri suplimentari, consultați Figura suplimentară S4. În toate cazurile, * P + /+ .

La dieta cu conținut ridicat de K +, șoarecii Af17 -/- și Af17 +/+ au avut fiziologie renală similară și TA la dieta cu conținut ridicat de K +. Șoarecii Af17 +/+ și Af17 -/- au fost hrăniți cu o dietă bogată în K + (6% K +) timp de până la 5 zile în cuști metabolice și analizați parametrii înainte (ziua 0) și după tratament, după cum sa indicat. n = 8 până la 26 pentru șoareci Af17 +/+ și n = 7 până la 25 pentru șoareci Af17 -/-. Pentru parametri suplimentari, consultați Figura suplimentară S5. În toate cazurile, * P + /+ .

Model pentru afectarea și restabilirea echilibrului Na + și a TA la șoarecii Af17 -/-. În condiții bazale, cum ar fi dieta normală cu Na +, ștergerea Af17 duce la creșterea semnificativă a metilării H3 K79 și, ulterior, la afectarea activității ENaC, perturbarea echilibrului Na + și scăderea TA. Plasma ușor crescută [aldo] nu este suficientă pentru a antagoniza efectul pierderii Af17 asupra metilării H3 K79 și, astfel, nu reușește să salveze fenotipul Af17 -/-. Sub exces de aldo, cum ar fi perfuzia de aldo sau dieta scăzută cu Na +, nivelurile de aldo crescute dramatic scad eficient metilarea H3 K79 indiferent de prezența sau absența Af17, ducând la niveluri comparabile de metilare H3 K79 și o fiziologie renală și fenotipul BP care nu se distinge între Af17 +/+ și Af17 -/- șoareci. Pentru claritate, mecanismele detaliate prin care Af17 23 și aldo 22 inhibă metilarea H3 K79 nu sunt prezentate. Linia punctată indică mecanisme necunoscute.