Afiliere

  • 1 Institutul de chimie bioorganică Shemyakin și Ovchinnikov, Academia Rusă de Științe, Moscova, 117997, Rusia. [email protected].

Autori

Afiliere

  • 1 Institutul de chimie bioorganică Shemyakin și Ovchinnikov, Academia Rusă de Științe, Moscova, 117997, Rusia. [email protected].

Abstract

Tratamentul oligopeptidazei B psihrofile native din Serratia proteamaculans (PSP, 78 kDa) cu chimotripsină (solubilă sau imobilizată pe sticlă poroasă modificată MPG-PA) în prezența a 50% glicerol conduce la producerea unei forme enzimatice trunchiate (PSP-Chtr,

serratia

66 kDa), care își păstrează activitatea spre substratul cu greutate moleculară mică al PSP, BAPNA, dar spre deosebire de PSP, este activ către substratul proteic azocasein. S-a demonstrat prin spectrometria de masă MALDI-TOF că PSP-Chtr nu are regiunea N-terminală a moleculei care învelește domeniul catalitic al PSP și se presupune că previne hidroliza substraturilor cu greutate moleculară ridicată. S-a stabilit, de asemenea, că fragmentul lipsă corespunde elementului N-terminal cu rangul cel mai înalt al structurii informaționale a PSP. Această constatare confirmă utilitatea metodei de analiză a structurii informaționale pentru ingineria proteinelor de enzime. Un tratament similar al PSP cu tripsină imobilizată a dus, de asemenea, la producerea unei forme de enzimă trunchiată stabilă (PSP-Tr,

75 kDa) căruia îi lipseau 22 de resturi de aminoacizi C-terminali și pierdeau complet activitatea enzimatică, probabil din cauza schimbărilor din mediul imediat al His652 al triadei catalitice.