Schema pentru prepararea peptidei de mătase.

Analiza spectrometrică de masă a peptidei de mătase. Cromatogramă tipică a SP obținută prin utilizarea sistemului TOF MS ES + de înaltă rezoluție.

Analiza cromatografică lichidă de înaltă performanță a peptidei de mătase. Cromatogramă HPLC pentru SP. Abrevieri: Ala, Alanine; Cys, cisteină; Asp, acid aspartic; Glu, acid glutamic; Phe, fenilalanină; Gly, Glycine; Al său, Histidina; Ile, izoleucina; Lys, Lizină; Leu, Leucine; Met, metionină; Pro, Proline; Arg, arginină; Ser, Serine; Thr, Treonină; Val, Valine; Tyr, tirozină; IS, interpolare standard (acid L-2-aminobutiric).

Peptida de mătase previne dezvoltarea obezității induse de dietă în obezitatea indusă de HFD. (A) Măsurători săptămânale de masă corporală, (B) câștig de masă corporală și (C) fotografii de șoareci reprezentativi tratați timp de 6 săptămâni. (D) Efectul SP asupra masei de organe din grupurile CD și HFD. * p p E) Consumul de alimente și (F) consumul de apă pe unitate de masă corporală. Concentrațiile serice (G) de creatinină și (H) de leptină au fost măsurate folosind truse colorimetrice. Datele sunt exprimate ca medie ± SD (n = 8). Valorile cu litere diferite au fost semnificativ diferite; p ab> b> c).

Efectul protector al peptidei de mătase împotriva acumulării de lipide în țesutul adipos alb de la șoarecii obezi induși de HFD. (A) Colorarea hematoxilinei și eozinei de sWAT și vWAT de la șoareci tratați timp de 6 săptămâni și cuantificarea procentului de diametru relativ al adipocitelor de sWAT și vWAT (datele au fost colectate de la secțiuni colorate H & E ale șoarecilor din fiecare grup, 15-30 celule pe aceeași zonă, utilizând software-ul Image J). Expresia factorilor adipogeni în (B) sWAT și (C) vWAT au fost evaluate prin western blot. Datele sunt exprimate ca medie ± SD (n = 8). Valorile cu litere diferite au fost semnificativ diferite; p ab> b> bc> c).

Efectul peptidei de mătase asupra rumenirii țesutului adipos alb la șoarecii obezi induși de HFD. Expresia markerilor de rumenire (PRDM16, PGC1α, UCP1 și UCP3) în (A) sWAT și (B) vWAT a fost determinată prin western blot. Expresia genelor legate de termogeneză în (C) sWAT și (D) vWAT a fost măsurată folosind qRT-PCR. * p p E) sWAT și (F) vWAT au fost capturate la o mărire de 800 ×. (G) Temperatura corpului rectal după 6 săptămâni de tratament (n = 10), măsurată în timpul zilei la o temperatură ambiantă de 22 ° C. Datele sunt exprimate ca medie ± SD (n = 8). Valorile cu litere diferite au fost semnificativ diferite; p ab> b> bc> c).

Peptida de mătase ameliorează steatoza hepatică și induce oxidarea acizilor grași la șoarecii hrăniți cu HFD. (A) Imagini reprezentative ale colorării roșii cu ulei a secțiunilor de ficat de la șoareci tratați timp de 6 săptămâni. (B) ALT seric și (C) AST au fost măsurate folosind truse colorimetrice. Nivelurile de expresie ale proteinelor implicate în lipogeneza (D) și oxidarea acidului gras (E). Datele sunt exprimate ca medie ± SD (n = 8). Valorile cu litere diferite au fost semnificativ diferite; p b> c).

Peptida de mătase inhibă acumularea de grăsimi și crește rumenirea în culturile primare de adipocite albe subcutanate. (A) Viabilitatea adipocitelor primare tratate cu SP timp de 24 de ore a fost evaluată utilizând un test MTT. (B) Efectul SP asupra acumulării lipidelor a fost evaluat folosind colorarea cu roșu ulei O. (C, D) Nivelurile de expresie ale proteinelor de C/EBPα, FABP4, CPT1 și UCP1 au fost măsurate în adipocite albe subcutanate. (E) Imaginile cu imunofluorescență ale adipocitelor au fost capturate la o mărire de 800 ×. După diferențiere, celulele au fost fixate cu metanol și apoi colorate cu MitoTracker ® ​​363 Deep Red sau anticorp anti-UCP1. (F) Browning-ul a fost promovat în adipocite cultivate cu 50 nM T3 și 1 mM rosiglitazonă și tratate cu SP și s-a măsurat expresia proteinelor genelor specifice BAT. Datele sunt exprimate ca medie ± SD (n = 4). Valorile cu litere diferite au fost semnificativ diferite; p b> c> d> e).

Efectele AMPK asupra morfologiei picăturilor lipidice și a expresiei UCP1 în culturile primare de adipocite albe subcutanate. (A, C) Morfologia a fost evaluată prin microscopie optică la o mărire de 400 ×. Bara de măsurare: 100 mM. (B, D) Celulele primare au fost tratate cu 10 uM AICAR sau 5 uM dorsomorfină, iar efectele asupra expresiei proteinelor au fost determinate folosind Western blot. Datele sunt exprimate ca medie ± SD (n = 4). Valorile cu litere diferite au fost semnificativ diferite; p b> c> d).

Abstract

dietetică

Schema pentru prepararea peptidei de mătase.

Analiza spectrometrică de masă a peptidei de mătase. Cromatogramă tipică a SP obținută prin utilizarea sistemului TOF MS ES + de înaltă rezoluție.

Analiza cromatografică lichidă de înaltă performanță a peptidei de mătase. Cromatogramă HPLC pentru SP. Abrevieri: Ala, Alanine; Cys, cisteină; Asp, acid aspartic; Glu, acid glutamic; Phe, fenilalanină; Gly, Glycine; Al său, Histidina; Ile, izoleucina; Lys, Lizină; Leu, Leucine; Met, metionină; Pro, Proline; Arg, arginină; Ser, Serine; Thr, Treonină; Val, Valine; Tyr, tirozină; IS, interpolare standard (acid L-2-aminobutiric).

Peptida de mătase previne dezvoltarea obezității induse de dietă în obezitatea indusă de HFD. (A) Măsurători săptămânale de masă corporală, (B) câștig de masă corporală și (C) fotografii ale șoarecilor reprezentativi tratați timp de 6 săptămâni. (D) Efectul SP asupra masei de organe din grupurile CD și HFD. * p p E) Consumul de alimente și (F) consumul de apă pe unitate de masă corporală. Concentrațiile serice (G) de creatinină și (H) de leptină au fost măsurate folosind truse colorimetrice. Datele sunt exprimate ca medie ± SD (n = 8). Valorile cu litere diferite au fost semnificativ diferite; p ab> b> c).

Efectul protector al peptidei de mătase împotriva acumulării de lipide în țesutul adipos alb de la șoarecii obezi induși de HFD. (A) Colorarea hematoxilinei și eozinei sWAT și vWAT de la șoareci tratați timp de 6 săptămâni și cuantificarea procentului de diametru adipocit relativ al sWAT și vWAT (datele au fost colectate din secțiunile colorate H & E ale șoarecilor din fiecare grup, 15-30 celule pe aceeași zonă, utilizând software-ul Image J). Expresia factorilor adipogeni în (B) sWAT și (C) vWAT au fost evaluate prin western blot. Datele sunt exprimate ca medie ± SD (n = 8). Valorile cu litere diferite au fost semnificativ diferite; p ab> b> bc> c).

Efectul peptidei de mătase asupra rumenirii țesutului adipos alb la șoarecii obezi induși de HFD. Expresia markerilor de rumenire (PRDM16, PGC1α, UCP1 și UCP3) în (A) sWAT și (B) vWAT a fost determinată prin western blot. Expresia genelor legate de termogeneză în (C) sWAT și (D) vWAT a fost măsurată folosind qRT-PCR. * p p E) sWAT și (F) vWAT au fost capturate la o mărire de 800 ×. (G) Temperatura corpului rectal după 6 săptămâni de tratament (n = 10), măsurată în timpul zilei la o temperatură ambiantă de 22 ° C. Datele sunt exprimate ca medie ± SD (n = 8). Valorile cu litere diferite au fost semnificativ diferite; p ab> b> bc> c).

Peptida de mătase ameliorează steatoza hepatică și induce oxidarea acizilor grași la șoarecii hrăniți cu HFD. (A) Imagini reprezentative ale colorării roșii cu ulei a secțiunilor de ficat de la șoareci tratați timp de 6 săptămâni. (B) ALT seric și (C) AST au fost măsurate folosind truse colorimetrice. Nivelurile de expresie ale proteinelor implicate în lipogeneza (D) și oxidarea acidului gras (E). Datele sunt exprimate ca medie ± SD (n = 8). Valorile cu litere diferite au fost semnificativ diferite; p b> c).

Peptida de mătase inhibă acumularea de grăsimi și crește rumenirea în culturile primare de adipocite albe subcutanate. (A) Viabilitatea adipocitelor primare tratate cu SP timp de 24 de ore a fost evaluată utilizând un test MTT. (B) Efectul SP asupra acumulării lipidelor a fost evaluat folosind colorarea cu roșu ulei O. (C, D) Nivelurile de expresie ale proteinelor de C/EBPα, FABP4, CPT1 și UCP1 au fost măsurate în adipocite albe subcutanate. (E) Imaginile cu imunofluorescență ale adipocitelor au fost capturate la o mărire de 800 ×. După diferențiere, celulele au fost fixate cu metanol și apoi colorate cu MitoTracker ® ​​363 Deep Red sau anticorp anti-UCP1. (F) Browning-ul a fost promovat în adipocite cultivate cu 50 nM T3 și 1 mM rosiglitazonă și tratate cu SP și s-a măsurat expresia proteinelor genelor specifice BAT. Datele sunt exprimate ca medie ± SD (n = 4). Valorile cu litere diferite au fost semnificativ diferite; p b> c> d> e).

Efectele AMPK asupra morfologiei picăturilor lipidice și a expresiei UCP1 în culturile primare de adipocite albe subcutanate. (A, C) Morfologia a fost evaluată prin microscopie optică la o mărire de 400 ×. Bara de măsurare: 100 mM. (B, D) Celulele primare au fost tratate cu 10 uM AICAR sau 5 uM dorsomorfină, iar efectele asupra expresiei proteinelor au fost determinate folosind Western blot. Datele sunt exprimate ca medie ± SD (n = 4). Valorile cu litere diferite au fost semnificativ diferite; p b> c> d).