Subiecte

O corecție a editorului la acest articol a fost publicată pe 03 mai 2019

Acest articol a fost actualizat

Abstract

Gelificarea L-Tyr (tBu) -OH în tetrahidrofuran (THF) a fost descoperit serendipit. S-a observat că acest compus cu greutate moleculară extrem de redusă (LMW) are capacitatea de a gelifica o mare varietate de solvenți organici (de ex., N, N-Dimetilformamidă (DMF), THF, butanol, toluen), chiar și în concentrații foarte scăzute (adică 0,1% în greutate/v în DMF). Adăugarea de baze precum NaOH și piperidină a îmbunătățit proprietatea gelului. Prin schimbarea grupului de protecție a lanțului lateral în tert-butildimetilsilil (TBDMS), un organogel care răspunde la ionii fluorurilor a fost, de asemenea, achiziționat. Acest nou organogelator a răspuns la o concentrație de ioni de fluor cât mai mică de 0,2 ppm. Caracterizarea microstructurilor și a comportamentelor în gel au fost studiate prin spectroscopie de difracție cu raze X (XRD), microscopie electronică de transmisie (TEM), măsurători reologice și simulări de dinamică moleculară (MD). Observațiile experimentale și simulările teoretice arată în mod constant o structură asemănătoare fibrelor gelului, în care moleculele organogelatoare sunt ținute împreună printr-o rețea densă de legături de hidrogen și prin interacțiunile van der Waals între grupurile hidrofobe.

Introducere

Rezultate si discutii

Gelificarea spontană a L-Tyr (tBu) -OH (2)

L-Tyr (COM)tBu) -OH este un compus ieftin disponibil comercial și este, de asemenea, simplu din punct de vedere sintetic pentru a produce cantitativ într-un singur pas din Fmoc-L-Tyr (tBu) -OH 29. Gelificarea are loc spontan în timpul următoarei reacții (Fig. 1).

acționează

Sinteza lui L-Tyr (tBu) -OH.

Scindarea grupării fluorenilmetiloxicarbonil (Fmoc) cu piperidină în THF a dus la gelificare în decurs de 15 minute în timpul reacției. După îndepărtarea subprodusului, gelificarea a fost realizată cu succes în aceleași condiții folosind L-Tyr pur (tBu) -OH care indică faptul că produsul secundar nu joacă un rol în procesul de gelificare. Această reacție a fost inițial realizată cu scopul de a sintetiza tirozina neprotejată pentru a fi utilizată într-un alt studiu și, în cele din urmă, ne-a condus la descoperirea serendipită a acestui nou organogelator, care a declanșat investigații suplimentare, după cum sa raportat mai jos.

Au fost observate aceleași proprietăți de gelificare pentru celălalt enantiomer, D-Tyr (tBu) -OH, așa cum era de așteptat. Cu toate acestea, nu s-a observat nicio formare de gel în cazul racului Tyr (tBu) -OH la concentrația minimă de gelificare. În plus, am observat că tert-restul butil joacă un rol semnificativ în procesul de gelificare, deoarece formarea gelului nu are loc nici pentru L-Tyr-OH, L-Phe-OH și L-Tyr (Me) -OH.

Screening aditiv și solvent pentru gelificare

Pentru a investiga proprietățile de gelificare ale L-Tyr (tBu) -OH, diferite combinații de aditivi și solvenți au fost luate în considerare folosind metoda inversării flaconului (tabelele 1 și 2). Tabelul 1 rezumă efectele diferiților aditivi (baze și alcooli) asupra gelificației în THF.

Gelurile au fost preparate în 1,0 ml de THF. După dizolvarea L-Tyr (tBu) -OH în solvent cu ajutorul băii cu ultrasunete la 40 ° C, s-au adăugat 10,0 μl de aditiv. Soluțiile au fost introduse din nou în baie cu ultrasunete timp de 4-10 minute. Formarea gelurilor a fost determinată folosind un test de inversare.

Gelificarea L-Tyr (tBu) -OH a fost testat în continuare într-o mare varietate de solvenți cu sau fără adăugarea agentului non-gelifiant, piperidină sau NaOH. Așa cum se arată în Tabelul 2, L-Tyr (tBu) -OH formează un gel cu o mare varietate de solvenți organici la concentrații remarcabil de scăzute.

Printre condițiile testate, DMF apare ca cel mai bun solvent pentru gelificare, cu o capacitate de gelificare la 0,1% în greutate/v, fără niciun aditiv. Mai mult, 2-etilhexanolul, atunci când este utilizat ca solvent, prezintă rezultate promițătoare de gelificare cu o concentrație de până la 0,2% în greutate/v%. Adăugarea unui agent non-gelifiant la cel din urmă gel schimbă doar aspectul gelului la transparent și nu are un impact semnificativ asupra concentrației minime de gelificare. În mod similar, toluenul, hexanul și 1,2-dicloroetanul par, de asemenea, a fi solvenți buni pentru gelificare numai cu adăugarea de piperidină. Prezența piperidinei reduce concentrația de gelificație pentru solvenți tert-butilmetileter și 1,2-dimetoxietan, din care au format o soluție la concentrațiile definite fără aditivi. În mod surprinzător, diluantul de celuloză, alcool izopropilic și n-alcoolul butilic, atunci când este utilizat ca solvenți, are ca rezultat un gel limpede fără piperidină, în timp ce adăugarea de piperidină formează soluții. Gelificarea uleiului de floarea-soarelui indică o potențială aplicare promițătoare a L-Tyr (tBu) -OH în domeniul livrării de medicamente 30,31,32. În mod similar, gelificarea motorinei de către L-Tyr (tBu) -OH a fost observat, indicând o posibilă funcție în recuperarea scurgerilor de petrol 3.10 .

Răspunsul gelului și fluorului ionic al L-Tyr (TBDMS) -OH

Am sintetizat L-Tyr (TBDMS) -OH (Fig. 2a) și am investigat proprietățile sale de gelificare în diferite condiții. Gelificarea acestui derivat a fost realizată atât în ​​THF, cât și în 2-etilhexanol, cu o concentrație minimă de 1% în greutate/v% în ambii solvenți. L-Tyr (TBDMS) -OH este sensibil la prezența fluorului, deoarece acesta din urmă poate declanșa scindarea legăturii Si-O pentru a forma L-Tyr-OH, așa cum este prezentat în Fig. 2b. Adăugarea de fluorură de sodiu la gelurile L-Tyr (TBDMS) -OH în 2-etilhexanol în concentrații de 0,2, 0,3 și 0,5 ppm a dus la o tranziție completă la soluție de gel în 44 ore, 18 ore și 1 oră, respectiv 2c) . Ionul fluor clivează porțiunea TBDMS pentru a produce L-Tyr-OH, care, după cum sa discutat anterior, nu prezintă proprietăți de gelificare în 2-etilhexanol, explicând tranziția gel-soluție observată după o anumită perioadă de timp. Prin urmare, sugerăm L-Tyr (TBDMS) -OH ca un gelator potențial promițător care poate fi utilizat pentru detectarea ionilor de fluor.

(A) Sinteza L-Tyr (TBDMS) -OH (b) Scindarea legăturii Si-O a L-Tyr (TBDMS) -OH în prezența ionului fluor. (c) Imagine a gelului complet la tranziția soluției de 2% în greutate/v% de L-Tyr (TBDMS) -OH în 2-etilhexanol ca solvent și piperidină ca aditiv după 1 oră după adăugarea a 0,5 ppm NaF (aq.)

Caracterizarea microstructurilor și comportamentelor în gel

Caracterizarea microstructurii L-Tyr (tGelul Bu) -OH, precum și ambalajul molecular la scară atomică au fost efectuate utilizând imagistica cu microscop electronic de transmisie (TEM) (Fig. 3a), măsurarea difracției cu raze X (XRD) (Fig. 3b) și dinamica moleculară MD ) simulări.

(A) Imagini TEM ale lui L-Tyr (tBu) -OH în THF/piperidină diluat cu apă miliQ. (Bara de scalare: 200 nm și 500 nm). (b) Model XRD al xerogelurilor cu și fără piperidină.

În Fig. 3a, imaginile TEM ale L-Tyr (tBu) -OH în THF cu adăugarea de piperidină arată formarea de nanofibre cu o lățime aproximativă de 40 nm și o lungime de câțiva micrometri. Modelele XRD raportate în Fig. 3b pentru probele preparate cu și fără aditiv piperidină indică faptul că piperidina nu participă la ambalarea moleculară, deoarece cele două modele sunt aproape identice.

Simularea MD a L-Tyr (tBu) -OH în THF a dus la formarea spontană de agregate stabilizate prin interacțiuni puternice de legătură de hidrogen între grupările carboxilat și amoniu ale gelatorului (Fig. S7a). O simulare similară, incluzând molecule de piperidină, a dus, de asemenea, la o auto-asamblare spontană, deși cu un motiv de interacțiune semnificativ diferit (Fig. S7b).

Deoarece o astfel de ambalare moleculară diferită ar avea ca rezultat un model XRD diferit, vom exclude cu siguranță rolul structural al piperidinei în formarea gelului. Rezultatele corespunzătoare sunt discutate în continuare în Informațiile de sprijin. Simularea ulterioară a microsecundei MD a L-Tyr pur (tBu) -OH evidențiază formarea unor rețele lungi de molecule care interacționează, care formează o serie de structuri asemănătoare fibrelor ambalate în paralel (Fig. 4), în acord cu imagistica TEM.

Reprezentarea structurii asemănătoare fibrelor obținută după o simulare MD de o microsecundă a L-Tyr pur (tBu) -OH. (A,b) Arătați respectiv o vedere laterală și de sus a casetei de simulare cu imaginile sale periodice. Liniile punctate delimitează unitatea celulară principală în care coloana vertebrală și lanțurile laterale ale atomilor de carbon ale fiecărei molecule sunt reprezentate în cian. Doar atomii coloanei vertebrale, care formează nucleul fiecărei fibre, sunt afișați pentru replică pentru a evidenția structura liniară a diferitelor ansambluri. O structură reprezentativă a două fibre care interacționează este prezentată în (c), cu două reprezentări pentru a arăta moleculele întregi pe partea stângă și pentru a evidenția interacțiunile din miezul fibrelor doar pe partea dreaptă. Legăturile de hidrogen sunt reprezentate cu linii albastre punctate și arată rețeaua prin care moleculele individuale interacționează pentru a forma fibre și le leagă punctual.

După cum este evidențiat în Fig. 4c și mai detaliat în Fig. S7, fiecare fibră este compusă dintr-un miez hidrofil cu o rețea puternică și compactă de legături de hidrogen, în timp ce lanțurile laterale hidrofobe sunt îndreptate spre exterior și asigură interacțiuni între fibre. De asemenea, am remarcat apariția sporadică a legăturilor de hidrogen care se ramifică între fibre, care ar putea participa la stabilitatea generală a ansamblului molecular. Analiza funcțiilor de distribuție radială (RDF; Fig. S8) pentru perechi specifice de atomi de-a lungul dinamicii a relevat o serie de vârfuri bine definite centrate la distanțe în concordanță cu difracțiile observate în modelul XRD. Simulările noastre nu au evidențiat nicio interacțiune stabilă de stivuire π - π între inelele aromatice ale L-Tyr (tBu) -OH, care se datorează cel mai probabil obstacolului steric mare de tGrupuri Bu. În schimb, vârful ascuțit și intens la 2θ = 26,65 ° (dhkl = 3,34 Å) în modelul XRD poate fi atribuit interacțiunii strânse observate între grupurile carboxilat și amoniu de-a lungul simulării, cu un RDF carbon-azot cu vârf puternic la distanță de 3,33 Å. Discuții suplimentare, detalii despre simulări și fișiere de parametri sunt, de asemenea, disponibile în Informații de suport.

Procesul de gelificare este declanșat de forțe motrice similare cu cele în joc în formarea micelelor inverse. Caracterul hidrofob al solventului sporește tendința părții polare a L-Tyr (tBu) -OH molecule pentru a interacționa între ele, într-un miez izolat cu hidrofob tGrupuri Bu îndreptate spre solvent. Spre deosebire de micele, totuși, dimensiunea redusă a coloanei vertebrale a aminoacizilor hidrofili împreună cu caracterul extrem de direcțional și dipolar al grupurilor chimice care interacționează favorizează formarea unei rețele liniare, mai degrabă decât vezicule sferice. Așa cum s-a prezis prin simulările MD (figurile 4 și S8), această rețea liniară se poate ramifica prin interconectarea fibrelor prin legături de hidrogen și interacțiunea van der Waals. Această ultimă observație ne conduce la postularea că gelificarea rezultă din formarea unei rețele tridimensionale de structuri interconectate asemănătoare fibrelor în soluție.

Pe scurt, L-Tyr (tBu) -OH și L-Tyr (TBDMS) -OH formează geluri datorită unei rețele dense de legături de hidrogen între grupările amoniu și carboxilat. Un număr de organogelatori derivați de aminoacizi au fost raportați în literatura de specialitate, prezentând substituție fie pe amină, fie pe gruparea carboxil. Din câte știm, totuși, nu a existat până în prezent niciun raport despre un organogelator natural derivat din aminoacizi care să poarte grupuri libere -NH2 și –COOH, pe care l-am arătat aici că este principalul factor care afectează structura tridimensională a gelului . De asemenea, tert-porțiunea butil pare să joace un rol crucial în procesul de gelificare prin prevenirea interacțiunilor π - π datorită obstacolului său steric. Acest lucru este demonstrat în continuare de incapacitatea L-Tyr (OMe) -OH de a forma un gel. Grupul metil pare a fi prea mic pentru a preveni interacțiunile π - π, ducând la precipitații în loc de gelificare în THF.

Măsurătorile reologice au fost efectuate pentru a investiga comportamentul gelului ambilor compuși, L-Tyr (tBu) -OH și L-Tyr (TBDMS) -OH (Fig. 5). O diferență mare între modulul de stocare dinamic G ″ și modulul de pierdere G ′ la toate frecvențele indică faptul că organogelurile în cauză prezintă caracter elastic ca materie moale în mod dominant. Pentru a dovedi efectul favorabil al aditivului care nu gelifică asupra gelului, a fost investigat și gelul cu piperidină adăugat (Fig. 5a). Deși am arătat că aditivii piperidinici nu au participat la structura moleculară a gelului, rezultatele reologice au arătat în mod clar că astfel de aditivi fără gelifiere au îmbunătățit proprietățile gelului. Diferența mai mare între G ″ și G ′ pentru organogelul care conține piperidină în comparație cu organogelul fără aditivi ne conduce la concluzia că prezența aditivului fără gelifiere a îmbunătățit proprietățile gelului acestor materiale moi.

Comportamentul viscoelastic al (A1% greutate/volum L-Tyr (tBu) -OH în 2-etilhexanol și 2-etilhexanol/piperidină; (b) 1% greutate/volum L-Tyr (TBDMS) -OH și 2-etilhexanol/piperidină.

Concluzie

Metode

Materiale

Toți reactivii sunt disponibili comercial și utilizați fără alte purificări. Fmoc-L-Tyr (COM)tBu) -OH, Fmoc-D-TyrtBu) -OH și L-Tyr-OH au fost cumpărate de la Chem-Impex International Inc; tert-Butildimetilclorosilan de la TCI Chemicals; DMF, 1,2-DME, imidazol, metanol și etanol de la Sigma Aldrich; THF, Toluen, MTBE, 1,2-DCE, n-BuOH, diizopropilamină și DBU de la Merck; ACN, trietilamină din Reactivi Carlo Erba; Piperidină și 2-etilhexilamină de la Acros Organics; hexan și izopropilamină din Lab Scan; dietilamina de la Riedel-de Jaen; 2-etilhexanol de la Veskim.

Sinteza L-Tyr (TBDMS) -OH (2)

L-Tyr (TBDMS) -OH a fost sintetizat pe baza sintezei literare a L-DOPA (TBDMS) 2-OH cu ușoare modificări 33. TBDMS-Cl (1,20 g, 8,28 mmol) dizolvat în MeCN anhidru (12,5 ml) a fost adăugat pe L-Tyr-OH (0,100 g, 5,05 mmol). Amestecul a fost răcit pe o baie cu gheață-apă timp de 10 minute. Apoi DBU (1,24 ml, 8,28 mmol) a fost adăugat prin picurare la amestecul de reacție timp de 10 minute. Reacția a fost agitată într-o baie de gheață timp de 4 ore și după aceea încă 20 de ore la temperatura camerei. Apoi, solventul a fost îndepărtat sub vid. Când s-a adăugat metanol, s-a format precipitat nedorit. După filtrare, solventul a fost îndepărtat sub vid. Produsul brut a fost spălat cu apă apoi, cu acetat de etil pentru a obține produsul pur. RMN de proton și carbon este prezentat în figurile S4 și, respectiv, S5.

1 H RMN (400 MHz, CD 3 OD) ± 7,00 (2 H, d, . = 8,5 Hz), 6,63 (2 H, dd, . = 6,6, 1,9 Hz), 3,55 (1 H, dd, . = 8,7, 4,3 Hz), 3,05 (1 H, dd, . = 14,6, 4,2 Hz), 2,75 (1 H, dd, . = 14,6, 8,7 Hz), 0,80 (9 H, s), 0,00 (6 H, s); 13 C RMN (100 MHz, CD 3 OD) δ 174,0 (1 C), 156,0 (1C), 131,6 (2C), 130,0 (1C), 121,5 (2C), 57,6 (1C), 37,5 (1C), 26,2 ( 3C), 19,0 (1C), −4,31 (2C). HRMS: calculat pentru [M-H] + C 15 H 26 NO 3 Si, 296,1682; găsit 296.1696. Puritate măsurată prin HPLC (Fig. S6): 98,3%.

Procedura generală de gelificare

Pentru a prepara 1% (greutate/volum) gel; 10 mg L-Tyr- (tBu) -OH a fost cântărit și plasat într-un flacon. S-a adăugat 1,0 ml solvent. Flaconul a fost plasat într-o baie cu ultrasunete timp de 4 minute. Apoi s-au adăugat 10,0 μl de aditiv pentru aditivul care conține geluri. Tubul Eppendorf a fost introdus din nou în baie cu ultrasunete timp de 4-10 minute. Temperatura băii cu ultrasunete este de aproximativ 40 ° C. Formarea gelului are loc spontan sau până la 1 oră, în funcție de solventul utilizat. Formațiile de gel au fost testate utilizând testul de inversare.

Fluorură ionică Răspunsul gelurilor de L-Tyr (TBDMS) -OH

După formarea gelului în 2-etilhexanol sub formă de 1% în greutate/v, 10 μL soluție de fluorură de sodiu a fost scăpată pe gel din soluția stoc (5 mg NaF în 1 ml apă) pentru a analiza efectul 0,5 ppm NaF. Apoi, s-a lăsat să rămână fără să se amestece. S-a observat tranziția completă a soluției gel cu ochiul liber și testul de inversare.

Imagistica prin microscopie electronică cu transmisie

Microscopul FEI Tecnai G2 Spirit BioTwin CTEM a fost utilizat pentru a imagina formațiunile fibrilare după auto-asamblare. 1% în greutate/v% gel de L-Tyr (tBu) -OH și Tyr (TBDMS) -OH au fost preparate proaspăt în THF/piperidină. După diluarea de 50 de ori cu apă, a fost aplicat pe rețeaua de Cu. Soluția în exces a fost îndepărtată după 2 minute și grila a fost colorată cu soluție de acetat de uranil 2%.

Măsurători reologice

1% în greutate/v% geluri de L-Tyr (tBu) -OH s-au preparat în 2-etilhexanol cu ​​și fără piperidină suplimentar proaspăt pentru măsurători reologice. În mod similar, 1% în greutate/v% gel de L-Tyr (TBDMS) a fost, de asemenea, pregătit pentru a investiga comportamentul reologic al acestuia. Physica MCR 301, a fost utilizat Anton Paar. La început, regimurile viscoelastice liniare ale deformărilor organogelurilor au fost determinate printr-un experiment de maturare a tulpinilor. Cu o limită de liniaritate a lui G ', au fost atribuite valorile de deformare utilizate pentru analizele controlate de deformare. Apoi, caracterul visco-elastic al probelor a fost examinat prin modulul de stocare dinamic G ″ și modulul de pierdere G ′. Măturarea frecvenței a fost scanată de la 0,1 la 100 Hz utilizând o tulpină țintă constantă determinată anterior.

Măsurări ale difracției cu raze X în pulbere

Măsurătorile XRD au fost efectuate utilizând X’Pert³ MRD cu radiații cu raze X Cu Kα (λ = 1,540598 Å). Geluri de L-Tyr (tBu) -OH în THF și THF/piperidină s-au preparat ca 3% în greutate/v% și s-au lăsat să se usuce în aer peste noapte și apoi s-a aplicat vid pentru a obține xerogeli.

Disponibilitatea datelor

Seturile de date generate și/sau analizate în timpul studiului curent sunt disponibile de la autorul corespunzător, la cerere rezonabilă.