Sanne M. van der Made

1 Departamentul de biologie umană și științe ale mișcării, Școala de nutriție, toxicologie și metabolizare NUTRIM, Centrul Medical al Universității Maastricht, 6200 MD Maastricht, Olanda

Tos T. J. M. Berendschot

2 University Eye Clinic Maastricht, Maastricht University Medical Center, 6202 AZ Maastricht, Maastricht Olanda

Aize Kijlstra

2 University Eye Clinic Maastricht, Maastricht University Medical Center, 6202 AZ Maastricht, Maastricht Olanda

Jogchum Plat

1 Departamentul de biologie umană și științe ale mișcării, Școala de nutriție, toxicologie și metabolizare NUTRIM, Centrul Medical al Universității Maastricht, 6200 MD Maastricht, Olanda

Date asociate

Abstract

Introducere

Ouăle sunt o sursă ieftină și bogată de proteine ​​de înaltă calitate, acizi grași esențiali, minerale și vitamine A, B12, D, K și folat. În plus, ouăle conțin cantități relativ mari de colesterol și luteină. Luteina este o xantofilă concentrată în retina umană, unde joacă un rol important în menținerea funcției vizuale. Nu este sintetizat în corpul uman și aportul depinde de surse alimentare, cum ar fi ouăle și legumele cu frunze verzi.

Se consideră că aportul crescut de alte componente dietetice, cum ar fi colesterolul și acizii grași saturați (SAFA), cresc concentrațiile serice de colesterol LDL și, ca atare, pot afecta funcția endotelială 1. Având în vedere faptul că s-a demonstrat că un aport crescut de colesterol din dietă crește colesterolul LDL seric 2 și raportul total: colesterol HDL 3, aportul de ou (gălbenuș) a fost descurajat în ultimele decenii și recomandările dietetice limitați aportul de SAFA la maximum 10en% 4. Cu toate acestea, dovezile - în principal din studii epidemiologice mari (cohorta prospectivă) - nu au arătat o relație semnificativă între aportul de ouă și BCV 5-7. Gălbenușurile de ouă nu numai că sunt bogate în colesterol, dar conțin și luteină, un carotenoid xantofil cu proprietăți antioxidante și antiinflamatoare. Concentrațiile serice de carotenoizi au fost asociate invers cu biomarkeri pentru predicția riscului bolilor cardiovasculare 8, 9 și concentrațiile serice de dimetilarginină asimetrică (ADMA) 10. Mai mult, un studiu chinez a arătat recent că o suplimentare de un an de luteină a îmbunătățit IMT carotidă la subiecții cu ateroscleroză subclinică 11 .

Intervenția utilizată în acest studiu este o combinație între untul preparat în mod tradițional, care este lichidul rămas după ce a amestecat untul din smântână și gălbenușurile de ou îmbogățite cu luteină. S-a emis ipoteza că laptele preparat în mod tradițional previne creșterea anticipată a concentrațiilor serice de colesterol atunci când se consumă 1,5 gălbenușuri de ou pe zi. Această ipoteză a fost testată și a fost raportată într-un studiu separat 12 .

Dacă aportul unei băuturi din ou îmbogățit cu luteină afectează funcția endotelială, având în vedere atât un aport crescut de luteină, cât și un aport alimentar de colesterol, nu a fost încă investigat și a fost scopul studiului descris aici.

Recent, am arătat că consumul zilnic de un an al unei băuturi din lapte de unt care conține gălbenuș de ou îmbogățit cu luteină nu a modificat semnificativ concentrațiile lipidice serice de post sau (apo) lipoproteine, în timp ce concentrațiile plasmatice de luteină au crescut semnificativ 13. Cu toate acestea, faptul că concentrațiile serice de colesterol nu au fost semnificativ crescute nu exclude posibilitatea ca funcția endotelială să fi fost afectată. Dovezile pentru această afirmație provin din studii anterioare efectuate la șoareci care au raportat o funcție endotelială scăzută la animalele hrănite cu o dietă bogată în colesterol, în ciuda faptului că concentrațiile circulante ale colesterolului seric au fost greu afectate 14. Prin urmare, deși profilurile lipidice în repaus alimentar au o mare valoare în predicțiile riscului BCV, aici am evaluat în continuare efectele asupra unui grup mai larg de parametri de risc cardiovascular în aceeași populație de studiu înainte și după un consum zilnic de un an de gălbenușuri de ou îmbogățite cu luteină. într-o băutură lactată. Mai mult decât atât, am măsurat capacitatea organismului de a se adapta la o provocare bogată în grăsimi amestecate prin evaluarea modificărilor metabolismului lipidic și glucozei postprandiale și a funcției endoteliale, măsurate prin dilatarea mediată de flux.

Subiecte și metode

Subiecte

O sută unu (N = 101) subiecți au fost recrutați pentru un studiu de intervenție dublu orb, controlat cu placebo, cu un design paralel, care a fost aprobat de Comitetul de Etică Medicală al Centrului Medical al Universității Maastricht și înregistrat la clinictrials.gov ca> NCT00902408 la 19 mai 2009. Evaluarea eligibilității a început în iulie 2009, măsurătorile finale au fost efectuate în decembrie 2011. Subiecții au fost recrutați prin intermediul reclamelor din ziarele din provincia Limburg, Olanda. Procesul a aderat la principiile declarației de la Helsinki și, înainte de începerea procedurii de screening, a fost obținut consimțământul scris în scris de la toți subiecții. Principalele criterii de includere au fost vârsta de cel puțin 50 de ani, neprimirea tratamentului pentru diabet sau concentrații crescute de colesterol seric și prezența unor semne timpurii de degenerescență maculară, dovadă fiind modificările epiteliului drusen și/sau ale pigmentului retinian la cel puțin un ochi evaluat prin fundus fotografie. Pe lângă aceasta, nu a fost permisă utilizarea suplimentelor alimentare care conțin luteină sau zeaxantină. Subiecții alergici la ouă sau produse din ouă nu au fost incluși.

În timpul urmăririi de 1 an a studiului, 12 participanți s-au retras (șase din grupul experimental (ou) și șase din grupul de control (Con). Un subiect care a finalizat studiul a fost permis din alte evaluări statistice din cauza concentrațiilor periferice de colesterol HDL, dovadă fiind distanța mare a lui Cook. Fluxul de participanți prin studiu și motivele retragerii (care nu au fost legate de produsul studiat ca atare) pot fi găsite în Figura 1 suplimentară .

Studiați proiectarea și produsele

Studiul a avut un design paralel randomizat, dublu orb, controlat cu placebo, cu o durată de un an. Subiecții au fost repartizați aleatoriu fie grupului Con, fie Egg înainte de a începe studiul în conformitate cu o schemă de randomizare prestabilită, generată de computer. Alocarea a fost ascunsă în plicuri sigilate numerotate secvențial și stocate de coordonatorul studiului. Intervenția a constat într-o băutură lactată pe bază de gălbenuș de ou îmbogățit cu luteină (furnizată de Newtricious R&D, Oirlo, Olanda). Gălbenușurile de ou au fost îmbogățite prin surse naturale, prin hrana găinilor ouătoare. Acest feed a respectat reglementarea UE privind nivelul maxim de xantofilă de 80 ppm. Apoi, gălbenușuri de ou îmbogățite au fost încorporate într-o băutură de 80 ml de lapte care furnizează în medie 1,4 mg luteină și 323 mg colesterol pe zi. Subiecții alocați grupului Con au primit o băutură comparabilă din unt, fără adăugarea de gălbenușuri. Culoarea băuturii de control a fost potrivită cu băutura de ou îmbogățită cu luteină, prin adăugarea de coloranți sintetici E104 și E110. Compoziția nutritivă a ambelor băuturi poate fi găsită în Tabelul suplimentar 1 .

Subiecții au participat la o provocare de masă mixtă la începutul studiului și din nou după un an de consum, fie de control, fie de băuturi de ou îmbogățite cu luteină. Masa mixtă cu conținut ridicat de grăsimi a constat din două brioșe, cu o compoziție totală de macronutrienți, așa cum este prezentată în tabelul suplimentar 2. Un lot de brioșe a fost pregătit pentru întregul studiu și depozitat la -20 ° C până la consum. În ziua testului postprandial, subiecții au ajuns la universitate după un post peste noapte. Mai întâi s-a efectuat o măsurare a febrei aftoase, urmată de inserarea unei canule intravenoase (Becton, Dickinson and Company, Franklin Lanes, NY, SUA) într-o venă antecubitală și o colecție a unei probe de sânge în post (T0). În continuare, subiecților li sa cerut să consume masa mixtă în decurs de 10 minute. Probele de sânge ulterioare au fost extrase 15 (T15), 30 (T30), 45 (T45), 60 (T60), 90 (T90), 120 (T120) și 240 (T240) min după consumul de masă mixtă. Subiecților li s-a permis să bea apă după bunul plac pe parcursul întregului test postprandial. În plus, subiecților li s-a cerut să completeze un chestionar validat privind frecvența alimentelor la momentul inițial și la sfârșitul perioadei de intervenție, după cum sa raportat în altă parte 13 .

Dilatarea mediată de flux

Prelevarea și analiza sângelui

Sângele a fost prelevat în tuburi care conțin NaF și tuburi separatoare de ser (Becton, Dickinson și Compania, Franklin Lanes, NY, SUA) la momentele indicate, care au fost între cele două măsurători ale FMD la momentul inițial și după 240 de minute. Tuburile care conțin NaF au fost plasate imediat pe gheață după prelevarea de probe de sânge, urmate de centrifugare la 1300 × g timp de 15 minute la 4 ° C. Tuburile separatoare de ser au fost lăsate să se coaguleze timp de cel puțin 30 de minute la 21 ° C înainte de centrifugare la 1300 × g timp de 15 minute la 21 ° C. Alicote din plasmă și ser au fost congelate direct în azot lichid și depozitate la -80 ° C până la analiză.

Concentrațiile de glucoză plasmatică au fost măsurate în plasma NaF la T0, 15, 30, 45, 60, 90, 120 și 240 (Horiba ABX, Montpellier, Franța). Concentrațiile de acid gras neesterificat (NEFA) au fost de asemenea analizate în plasma NaF (kit NEFA; WAKO Chemicals, Germania) la momentele indicate. Concentrațiile de TAG, corectate pentru glicerol liber, au fost determinate în probe de ser din T0, 15, 30, 45, 60, 120 și 240 (GPO Trinder; Sigma Diagnostics).

Probele de ser de post au fost analizate pentru concentrațiile de colesterol total, HDL, TAG și apolipoproteina A-I (apoA1) și apolipoproteina B100 (apoB100). Concentrațiile de colesterol LDL au fost calculate în conformitate cu ecuația Friedewald 16 .

Analize statistice

Toate rezultatele sunt prezentate ca medie ± SD, cu excepția cazului în care se indică altfel. Diferențele în concentrațiile inițiale, precum și modificările parametrilor de risc metabolic și FMD între grupul Egg și Con au fost testate folosind eșantioane de testare t ale unui student independent. Coeficienții de corelație Pearson au fost utilizați pentru a calcula corelațiile. Modificările glicemiei postprandiale, TAG și NEFA au fost evaluate prin calcularea diferențelor la un subiect între momentul inițial și sfârșitul intervenției pentru fiecare punct de timp postprandial. Diferențele dintre grupul Egg și Con au fost evaluate prin analize de model mixt liniar (LMM) cu tratament și punct de timp ca factori fixați în cadrul subiectului și tratament × timp ca termen de interacțiune. Dacă termenul de interacțiune nu a fost semnificativ, acesta a fost omis din model. Dacă timpul factorului a fost semnificativ, s-au efectuat teste post hoc cu corecție Bonferroni pentru a compara concentrațiile cu concentrațiile inițiale. Schimbarea răspunsurilor la febra aftoasă înainte și după o masă mixtă la momentul inițial a fost scăzută din răspunsul înainte și după o masă mixtă după intervenția de un an. Diferențele dintre aceste răspunsuri au fost evaluate de testul T al unui student independent.

Deoarece rezultatul principal al acestui studiu a fost densitatea optică a pigmentului macular (MPOD), calculul puterii statistice a fost inițial bazat pe acest parametru 17 .

Diferențele au fost considerate semnificative statistic dacă P1. Caracteristicile de bază ale celor optzeci și nouă de subiecți care au finalizat studiul sunt prezentate în Tabelul 1. Un subiect a fost permis din analizele finale din cauza concentrațiilor periferice de colesterol HDL. Prin urmare, rezultatele parametrilor metabolici sunt prezentate pentru optzeci și opt de subiecți (N = 45 în ou și N = 43 în grupul Con). În cadrul acestui grup de optzeci și opt de subiecți, au existat probleme tehnice în timpul măsurării febrei aftoase într-una din zilele de testare, ceea ce a împiedicat analiza corectă la cinci subiecți (unul în grupul Con și patru în grupul Egg). În plus, opt subiecți (patru în ambele grupuri) au fost autorizați din analiza statistică a febrei aftoase, din cauza calității slabe a măsurătorilor aftelor. Prin urmare, rezultatele FMD sunt afișate pentru șaptezeci și cinci de subiecți (N = 40 în ou și N = 35 în grupul Con).

tabelul 1

Caracteristicile inițiale, lipidele serice și lipoproteinele (apo), markerii pentru metabolismul colesterolului și funcția hepatică și renală a participanților la studiu în grupurile de băutură de ou (ou) și control (Con) 1 .

Ou (N = 45) Con (N = 43)
Sex (M/F)15/3014/29
Vârsta (y)62 ± 662 ± 8
Fumatul (da/nu) 2 18/2616/27
IMC (kg/m 2)26,9 ± 3,626,3 ± 3,7
Tensiunea arterială sistolică (mmHg)133 ± 18136 ± 23
Tensiunea arterială diastolică (mmHg)76 ± 978 ± 11
Dilatarea mediată de flux (%) 3 2,48 ± 1,742,59 ± 2,20
Ser colesterol total (mmol/L)6,01 ± 1,146,04 ± 1,15
Colesterol LDL seric (mmol/L)3,82 ± 1,063,87 ± 0,98
Colesterol HDL seric (mmol/L)1,65 ± 0,411,67 ± 0,39
Ser apoB100 (g/L)0,99 ± 0,240,99 ± 0,22
ApoAI seric (g/L)1,38 ± 0,211,38 ± 0,21
Ser TAG (mmol/L)1,18 ± 0,631,09 ± 0,45
Glucoză plasmatică (mmol/L)5,46 ± 0,435,41 ± 0,46
HsCRP seric (mg/L)2,49 ± 4,131,96 ± 2,17
Plasma NEFA (μmol/L)503 ± 167518 ± 209
Ser de creatinină (μmol/L)70,8 ± 13,475,0 ± 12,4
Ser ALP (IU/L)74,9 ± 16,684,3 ± 22,6 *
Ser GGT (IU/L)28,2 ± 16,724,7 ± 12,6
Ser ASAT (IU/L)19,6 ± 7,222,6 ± 12,4
INSTRUMENTE serice (IU/L)21,6 ± 6,623,9 ± 12,6
Bilirubină serică (μmol/L)15,0 ± 4,516,6 ± 7,1

1 Valorile sunt mijloace ± SD. * Diferit de Con, P 2 Nu a fost furnizat statutul de fumat al unui subiect din grupul Ouă. 3 Rezultatele dilatației mediate de flux sunt prezentate pentru N = 42 în grupul Egg și N = 39 în grupul Con.

La aportul de energie inițial și proporția de energie din carbohidrați, grăsimi și proteine ​​totale, precum și aportul de micronutrienți a fost comparabilă între grupul Egg și Con. În afară de un aport alimentar mai ridicat de colesterol în grupul cu ouă, comparativ cu grupul Con (P 13 .

Lipide de post, (apo) lipoproteine ​​și FMD

Așa cum s-a descris mai devreme, nu s-au găsit modificări semnificative în colesterolul total al serului, HDL și LDL, raportul colesterolului total la HDL, apoB100, apoAI, TAG și NEFA între grupul Egg și Con în timpul intervenției de 1 an 13. Așa cum se arată în FIG. 1, nu s-a găsit nicio diferență semnificativă în febra aftoasă de post între grupurile de la începutul intervenției (ou vs. con; 2,6 ± 1,7% față de 2,5 ± 2,1%, P = 0,92). De asemenea, nu s-a observat nicio modificare semnificativă a tensiunii arteriale sau a IMC. Mai mult, nu au existat corelații semnificative între oricare dintre parametrii metabolici și febra aftoasă (datele nu sunt prezentate).

băutură

Modificarea% FMD măsurată la începutul intervenției (0 luni, linii solide) și la sfârșitul intervenției (12 luni, linii punctate) în grupul Egg (runde) și în grupul Con (pătrate). Nu s-au găsit diferențe semnificative. Valorile exacte ale FMD sunt date în tabelul însoțitor.

Glicemia și lipemia postprandială

În concluzie, arătăm aici că consumul zilnic al unei băuturi lactate care conține gălbenușuri de ou îmbogățite cu luteină nu a avut niciun efect advers asupra funcției endoteliale sau asupra metabolismului glucozei și lipidelor postprandiale la subiecții cu semne timpurii de degenerescență maculară.