Nu sunteți sigur ce ligă să alegeți? Consultați diagrama proprietăților ADN și ARN Ligază.

T4 ARN Ligaza 2, KQ trunchiată ligează capătul 5 ’pre-adenilat al ADN-ului sau ARN-ului la capătul 3’ al ARN-ului.

  • Activitate redusă de adenilare a lizilului
  • Izolat de o sursă recombinantă
  • Livrat cu tampon de reacție 10X
  • Necesită ARN sau ADN pre-adenilat 5 'pentru ligare
  • Testat pentru absența endonucleazelor, exonucleazelor, RNazelor și fosfatazelor
  • Nu sunteți sigur ce ligă să alegeți? Consultați diagrama proprietăților ADN și ARN Ligază

Video prezentat

trunchiat

Evitarea contaminării cu RNase

T4 ARN Ligaza 2, KQ trunchiată (T4 Rnl2tr R55K, K227Q) ligează în mod specific capătul 5´ preadenilat al ADN-ului sau ARN-ului la capătul 3´ OH al ARN-ului. Enzima nu folosește ATP pentru ligare, dar necesită linkeri pre-adenilați.

T4 Rnl2tr R55K, K227Q este un mutant în dublu punct al T4 ARN ligazei 2, trunchiat (NEB # M0242). Mutația K227 în T4 ARN Ligaza 2 reduce enzima lizil adenilare (1). K227Q reduce formarea produselor de ligatură nedorite (concatemeri și cercuri) de către T4 Rnl2tr (2,3), prin reducerea activității de urmărire a T4 Rnl2tr în transferul grupelor adenilil de la linkeri la 5´-fosfați de intrare ARN (3). Mutația R55K în T4 Rnl2tr K227Q crește activitatea de ligare a enzimei la niveluri similare cu T4 Rnl2tr (3).

Excluderea ATP, utilizarea linkerilor pre-adenilate și activitatea redusă a enzimei lizil adenilării oferă cel mai mic fond posibil în reacțiile de ligare. Această enzimă a fost utilizată pentru ligarea optimizată a linkerului pentru construirea unei biblioteci de secvențializare cu randament ridicat de ARN mic (4).

Sursa produsului

Reactivi furnizați

Următorii reactivi sunt furnizați împreună cu acest produs:

NEB #Component NameComponent #Stored at (° C) AmountConcentration
    M0373S-20
ARN T4 Ligaza 2, KQ trunchiat M0373SVIAL -20 1 x 0,01 ml 200.000 unități/ml
T4 ARN Ligază tampon de reacție B0216SVIAL -20 1 x 1,5 ml 10 X
PEG 8000 B1004SVIAL -20 1 x 1 ml 1 X
ARN T4 Ligaza 2, KQ trunchiat M0373LVIAL -20 1 x 0,05 ml 200.000 unități/ml
T4 ARN Ligază tampon de reacție B0216SVIAL -20 1 x 1,5 ml 10 X
PEG 8000 B1004SVIAL -20 1 x 1 ml 1 X

Caracteristici ale aplicației

  • Ligează un ADN pre-adenilat sau o secvență de ARN la orice capăt de ARN 3´
  • Alăturați-vă un singur exemplu catenar adenilat la ARN-uri mici pentru crearea de biblioteci ADNc
  • Alăturați-vă unui singur exemplu catenar adenilat la ARN pentru construcția de biblioteci ADNc specifice catenelor.

Definiția unității

200 de unități este definită ca cantitatea de enzimă necesară pentru a da ligarea 80% a unui ARN de 31 mer la capătul pre-adenilat al unui ADN de 17 mer [Linker de clonare universal miARN (NEB # S1315)] într-un volum total de reacție de 20 μl în 1 oră la 25 ° C.

5´-FAM- rArGrUrCrGrUrArGrCrCrUrUrUrArUrCrCrGrArGrArUrUr CrArGrCrArArUrA-3´
5´-rAppCTGTAGGCACCATCAAT - NH2-3´

Condiții de reacție

1X tampon de reacție T4 ARN ligază
Incubați la 25 ° C

1X T4 Tampon de reacție ARN ligază
50 mM Tris-HCI
10 mM MgCI2
1 mM TDT
(pH 7,5 @ 25 ° C)

Conditii de depozitare

10 ml Tris-HCI
100 mM NaCI
0,1 mM EDTA
1 mM TDT
50% glicerol
pH 7,5 @ 25 ° C