• Găsiți acest autor pe Google Scholar
  • Găsiți acest autor pe PubMed
  • Căutați acest autor pe acest site
  • Pentru corespondență: [email protected]

ABSTRACT

Un fir comun între febrele hemoragice virale (VHF) este capacitatea agentului etiologic de a dezactiva răspunsul imun al gazdei prin direcționarea și manipularea celulelor care inițiază răspunsul antiviral, ducând la poveri virale copleșitoare și dereglare imunitară și vasculară. Afectarea endotelială observată ar putea fi, prin urmare, rezultatul efectelor directe ale replicării virusului și/sau rezultatul indirect al mai multor mecanisme induse de gazdă, inclusiv citokinele (13, 20, 35).

rolurile

Febra hemoragică Crimeea-Congo (CCHF) este o zoonoză virală potențial fatală transmisă de căpușe (ratele de mortalitate sunt de până la 30%), cu cazuri raportate în părți din Africa, Asia, Europa de Est și Orientul Mijlociu. Agentul cauzal, virusul CCHF (CCHFV), membru al genului Nairovirus, familia Bunyaviridae, este cel mai răspândit virus transmis de căpușe și al doilea cel mai răspândit dintre toate arbovirusurile importante din punct de vedere medical, după virusul dengue (6, 22, 42) . Ca și în cazul altor boli transmise de vectori, distribuția bolii urmează îndeaproape distribuția globală a vectorului său, Hyalomma sp. căpușe. Ființele umane se infectează prin mușcături de căpușe sau prin contactul cu sânge, fluide corporale care conțin sânge sau țesuturi de animale viremice sau pacienți umani în timpul fazei acute a infecției (6, 13, 42). Oamenii par a fi singura gazdă a CCHFV în care se manifestă boala. Infecția umană este de obicei caracterizată printr-o boală febrilă cu cefalee, mialgie și erupție peșețială, frecvent urmată de o stare hemoragică cu hepatită necrotică. Stadiul acut al bolii la supraviețuitori durează de obicei între 15 și 20 de zile, după care începe perioada de convalescență, caracterizată prin slăbiciune prelungită, puls slab, confuzie și uneori căderea completă temporară a părului (12, 18, 42).

Până în prezent, patogeneza CCHF nu a fost bine descrisă, dar având în vedere asemănarea strânsă dintre CCHF și febra hemoragică Ebola (EHF), s-a emis ipoteza că CCHF, la fel ca EHF, ar putea fi rezultatul leziunii directe a virusului. țesuturile infectate în combinație cu efectele indirecte ale răspunsurilor imune ale gazdei (4, 41). Încărcătura virală și citokinele inflamatorii au fost implicate recent în patogeneza bolii (8, 11, 17, 28, 29). Cu toate acestea, ambii factori au fost studiați până acum separat. Pentru a elucida în continuare rolul încărcăturii virale și al citokinelor, prezentăm primul studiu care descrie influențele interacționale ale mecanismelor imune ale gazdei și ale încărcăturii virale asupra severității și rezultatului CCHF. Studiul se bazează pe influențele diferențiale ale sarcinii ARN CCHFV, răspunsul anticorpilor și producția de citokine pro- și antiinflamatoare în serurile pacienților cu CCHF acut confirmat din Kosovo.

(Rezultatele studiului au fost parțial prezentate la al XIV-lea Congres Internațional de Virologie, 5-15 august 2008, Istanbul, Turcia [32a].)

MATERIALE ȘI METODE

Pacienți și colectarea probelor. Probele de ser în fază acută de la 46 de pacienți din Kosovo cărora li s-a diagnosticat infecția cu CCHFV între 2001 și 2007 au fost incluse în acest studiu. Pacienții au fost tratați la Clinica de boli infecțioase, Centrul Clinic Universitar din Kosovo, Pristina, Kosovo, iar datele clinice pentru pacienți au fost colectate retrospectiv. Probele de sânge ale pacienților au fost obținute în momentul internării. Serurile au fost separate de celulele sanguine și stocate la -80 ° C până la utilizarea ulterioară. În cursul bolii, diagnosticul clinic a fost confirmat prin teste IgM și IgG imunoenzimatic legate (ELISA) și/sau printr-o transcripție reversibilă în timp real cantitativă-PCR (qRT-PCR), așa cum a fost descris anterior, 11 ).

Pacienții au fost împărțiți în trei grupuri, moderate, severe sau fatale, în funcție de severitatea și rezultatul bolii. Pacienții supraviețuitori au fost clasificați ca având evoluție severă sau moderată a bolii pe baza parametrilor clinici și de laborator propuși de Swanepoel și colab. (36), Ergonul și colab. (15) și Cevik și colab. (9). În mod specific, pacienții care îndeplinesc cel puțin trei dintre următoarele criterii au fost definiți ca având CCHF sever: prezența manifestărilor hemoragice profunde (este necesară transfuzia de sânge), valorile crescute ale creatininei serice, valorile crescute ale transaminazelor serice și hipotensiunea arterială (analize de laborator ale tensiunii arteriale). -Titrul anticorpului CCHFV Prezența și nivelurile de anticorpi anti-CCHFV în probele de ser au fost determinate prin teste IgM și IgG enzimatic legate (ELISA) IgM și IgG folosind antigene din CCHFV inactivat (tulpina IbAr 10200) crescute în celulele Vero E6 așa cum s-a descris anterior (5 ).

(ii) Sarcina ARN CCHFV. ARN-ul total a fost extras din probele de ser de reactiv Trizol LS (Invitrogen Life Technologies), în conformitate cu instrucțiunile producătorului. Pentru testul qRT-PCR, a fost folosit kitul de sistem Superscript III Platinum One-Step qRT-PCR (Invitrogen Life Technologies), iar testul a fost efectuat așa cum a fost descris anterior (11).

Caracteristici clinice și rezultate de laborator pentru 46 de pacienți cu CCHF acut în funcție de severitatea/rezultatul bolii

Răspunsul anticorpului și sarcina ARN CCHFV. Nivelurile de anticorpi anti-CCHFV au fost măsurate în toate probele incluse în studiu. Datele noastre nu arată nicio relație între prezența anticorpilor IgM și clasificarea clinică (P = 0,61), în timp ce anticorpii IgG au fost detectați doar la 5 eșantioane de pacienți care au supraviețuit bolii (Tabelul 2). Deși nivelurile observate de anticorpi IgM la pacienții cu rezultat fatal au fost mai mici decât la pacienții care au supraviețuit infecției - doar 2 (18,2%) pacienți care au murit cu titruri de anticorpi peste 1: 1.600 comparativ cu 12 (34,3%) pacienți supraviețuitori - diferența a fost nesemnificativ (P = 0,3).

Nivelurile de citokine, încărcăturile de ARN CCHFV și titrurile de anticorpi IgM și IgG anti-CCHFV, în funcție de evoluția/rezultatul bolii, în probele de ser de la pacienții cu infecție acută cu CCHFV

Compararea încărcăturii serice de ARN CCHFV și evoluția clinică/rezultatul bolii la pacienții cu CCHF acut. Logaritmul (până la baza 10) a fost utilizat când s-a luat în considerare încărcătura virală. Barele orizontale prezintă valori mediane.

Corelația dintre sarcina ARN CCHFV și ziua bolii pentru pacienții cu rezultat fatal al CCHF și pacienții care au supraviețuit bolii. Logaritmul (până la baza 10) a fost utilizat când s-a luat în considerare încărcătura virală.

Când a fost analizată relația dintre răspunsul detectabil al anticorpilor și sarcina ARN CCHFV, s-a observat o corelație inversă semnificativă a încărcăturii virale cu răspunsul detectabil al anticorpilor, cu valori medii ale ARN-ului viral log cel mai mare la pacienții fără anticorpi detectabili (7,44 log10 copii/ml) și cel mai mic la pacienții cu anticorpi anti-CCHFV IgM și IgG detectabili (4,01 log10 copii/ml) (P = 0,033) (Fig. 3 A). Cu toate acestea, atunci când a fost luată în considerare și clasificarea clinică, s-a arătat că o corelație inversă poate fi observată numai la pacienții care au supraviețuit infecției (P = 0,003), în timp ce nu a fost detectată nicio modificare a valorilor ARN virale odată cu dezvoltarea răspunsului anticorpului. la pacienți.cu rezultat fatal al CCHF (P = 0,76) (Fig. 3B).

Compararea încărcării serice a ARN-ului CCHFV și a stării anticorpilor la pacienții cu CCHF acut în general (A) și în funcție de rezultatul bolii (B). Logaritmul (până la baza 10) a fost utilizat când s-a luat în considerare încărcătura virală. Barele orizontale prezintă valori mediane.

Comparația concentrațiilor serice de IL-10, IL-12, IFN-γ și TNF-α și evoluția clinică/rezultatul bolii la pacienții cu CCHF acut. Barele orizontale prezintă valori mediane. Liniile punctate reprezintă limitele superioare ale valorilor normale.

Corelația dintre concentrațiile serice de IL-10, IL-12, IFN-γ și TNF-α și încărcătura de ARN viral la pacienții cu CCHF acut. Logaritmul (până la baza 10) a fost utilizat când s-a luat în considerare încărcătura virală.

DISCUŢIE

Pe baza rezultatelor obținute, sugerăm că o combinație de niveluri ridicate de citokină regulatoare IL-10, care inhibă imunitatea mediată de celule prin reglarea în jos a expresiei IL-12, cu niveluri ridicate de citokine proinflamatorii IFN-γ și TNF-α ar putea juca rol important în patogeneza CCHF. Rezultate foarte similare, cu supraproducție atât a citokinelor proinflamatorii (IFN-γ și TNF-α), cât și a citokinelor antiinflamatorii (IL-10 și IL-6) și niveluri relativ scăzute de IL-12 au fost observate la pacienții cu infecție cu virusul dengue, o altă boală virală caracterizată prin scurgeri de plasmă și o creștere a permeabilității microvasculare (19, 21, 23, 26, 30). Importanța unui răspuns regulator puternic al citokinelor care duce la creșterea viremiei și, în consecință, la un răspuns inflamator puternic, posibil sistemic, a fost implicată și în patogeneza altor VHF, cum ar fi Lassa și Ebola (3, 34, 38).

Citokinele, chemokinele și alți mediatori inflamatori funcționează într-o manieră pleiotropă, acționând asupra multor tipuri diferite de celule pentru a regla răspunsul imun al gazdei. De obicei, acțiunile lor antimicrobiene sunt limitate la zone de infecție. Cu toate acestea, atunci când sunt prezente în concentrații mari, acestea pot acționa sistemic și pot avea efecte toxice sau chiar letale. Se consideră că o dereglare a răspunsurilor la citokine și chemokine provoacă sindromul de scurgere capilară, care este o caracteristică proeminentă a VHF (1, 20).

În concluzie, rezultatele studiului nostru favorizează ipoteza că CCHF ar putea fi rezultatul unui răspuns imunitar întârziat și reglat în jos cauzat de IL-10, care duce la replicarea crescută și răspândirea CCHFV în tot corpul. În consecință, aceasta declanșează o producție crescută de IFN-γ și TNF-α, citokine care mediază disfuncția vasculară, coagulare intravasculară diseminată, insuficiență de organ și șoc atunci când sunt prezente în concentrații mari. Au fost necesare studii suplimentare, incluzând de preferință probe de pacienți în serie, pentru a testa ipoteza noastră. De asemenea, mai mulți factori sunt, fără îndoială, implicați în patogeneza CCHF și așteaptă să fie determinați.

MULȚUMIRI

Afirmăm că nu există un potențial conflict de interese.