Șoarecii mai slabi prezintă ataxie cerebelară, epilepsie de absență și diskinezie paroxistică și atrofie cerebelară severă, rezultată din degenerarea a aproximativ jumătate din granulele cerebeloase, celulele Purkinje și Golgi.

mouse

Termeni asociați:

  • Factor al necrozei tumorale alfa
  • Macrofage de țesut adipos
  • Fenotip
  • Microflora
  • Flora intestinului
  • Țesut adipos
  • Mouse Mutant
  • Rezistenta la insulina
  • Țesut adipos alb
  • Ob/Ob Mouse

Descărcați în format PDF

Despre această pagină

Modele de șoarece de distonie

b. Tulburare motorie (segment video 2)

Șoricel Leaner

Caracteristicile șoarecilor mai slabi heterozigoți

Rapoartele timpurii au sugerat că șoarecii mai slabi heterozigoți nu s-au putut distinge comportamental și morfologic de șoarecii de tip sălbatic, dar acum știm că nu este cazul. Studiile funcționale au arătat o reducere de ~ 30% a conductivității Ca 2+ în celulele Purkinje mai slabe heterozigoțe. Șoarecii heterozigoți mai slabi prezintă o afectare dependentă de vârstă pe testul rotarodului și a firului agățat și învățarea spațială și tulburările de memorie în labirintul de apă Morris. Disfuncția progresivă a reflexelor de evadare este observată și la șoarecii mai slabi heterozigoți și prezintă afectarea învățării motorii în reflexul vestibulo-ocular, sugerând că întreruperea subtilă a curenților Cav2.1 Ca 2+ este suficientă pentru a perturba funcția motorie.

Măsurarea răspunsurilor biologice cu microscopie automată

Ralph J. Garippa,. Achim Kirsch, în Methods in Enzymology, 2006

Pregătirea țesuturilor

Se folosesc trei creiere obeze induse de dietă (DIO) și trei șoareci slabi (C57Bl/6J) (Van Heek și colab., 1997). Folosind condiții libere de RNază, creierul este îndepărtat rapid, plasat într-un criomold, acoperit cu compus OCT (țesut înghețat Tissue Tek care încorporează mediul Sakura Finetek, Torrance, CA), înghețat în azot lichid și secționat în serie la 7-10 μm în un criostat. Secțiunile sunt montate pe diapozitive de microscop simple (neacoperite) și plasate imediat pe gheață uscată. Secțiunile sunt stocate la –70 °. Lamele sunt fixate în etanol 70%, clătite în apă distilată fără RNaază, colorate în acetat de crezil violet (pentru a identifica nucleele de interes) și deshidratate în etanol gradat (95% și absolut) cu un ultim 5 minute în xilen ca ultimul pas al procedurii. Lamele sunt apoi plasate într-un desicator pentru uscare. Diapozitivele complet uscate sunt utilizate pentru microscopie cu captare cu laser.

În conformitate cu protocolul producătorului, nucleele din următoarele regiuni hipotalamice sunt microdisecate pentru studii ulterioare: nucleu arcuat, girus dentat, hipotalamus dorsomedial, hipotalamus lateral, amigdala mediană, eminență mediană, nucleu paraventricular și hipotalamus ventromedial. Aceste regiuni hipotalamice sunt identificate ca fiind menționate în Franklin și Paxions (1997). După efectuarea microdisecției de captare cu laser, capacul (cu celulele captate) este plasat într-un tub de reactiv conținând 200 μl tampon de denaturare ARN (GITC) și 1,6 μl β-mercaptoetanol. Tubul este apoi inversat timp de 2 minute pentru a permite digerarea țesutului de pe capac. Reactivul care conține nuclee microdisecate este apoi gata pentru extracția ARN, izolarea, amplificarea etc.

Metode de biologie a țesutului adipos, partea B

Qinghui Xu,. David A. Bernlohr, în Methods in Enzymology, 2014

2.1.1 Pregătirea extractelor din țesut adipos alb epididim

Un gram de țesut adipos alb epididimal (EWAT) de la șoareci slabi sau obezi este incubat pe gheață în 1 ml tampon biotină hidrazidă pH 5,5 (100 mM acetat de sodiu; 20 mM NaCl; 0,1 mM EDTA, suplimentat cu inhibitori de protează; și 0,25 mM butilat hidroxitoluen (BHT)) și omogenizat timp de 30 s folosind un omogenizator electronic (PowerGen 125). Probele sunt agitate scurt și centrifugate la

1200 rpm timp de 10 minute la 4 ° C într-o microcentrifugă pentru a pluti tortul lipidic. Faza apoasă inferioară și orice peletă sunt transferate într-un nou tub de centrifugă și suplimentate cu SDS la o concentrație finală de 2%. Probele sunt apoi încălzite la 65 ° C timp de 5 minute și supuse ultracentrifugării la 100.000 × g timp de 1 oră la 4 ° C pentru a elimina reziduurile insolubile. Concentrația de proteină solubilizată cu detergent este determinată utilizând testul acidului bicinchoninic (Sigma-Aldrich, St Louis, MO).

Modele de șoarece de distonie

27.2.2.2.2 Tulburare motorie (după cum observă autorii)

Cacna1a-mutanți nuli prezintă o tulburare motorie similară cu cea a mutanților mai slabi juvenili, cu unele diferențe minore. În comparație cu mutanții mai slabi, mutanții Cacna1a-nuli sunt mult mai mici pe parcursul dezvoltării, au deficiențe motorii mai profunde și prezintă o activitate mult mai puțin spontană. Ei pier aproape uniform la vârsta de 3-4 săptămâni când trecerea de la alăptare la consumul de alimente solide are loc la șoareci normali. Cu hidratare parenterală zilnică și nutriție, un procent foarte mic de mutanți α1A-nuli supraviețuiesc până la maturitate. Mutanții adulți Cacna1a-null seamănă din nou cu șoarecii adulți mai slabi, dar au tulburări motorii mai severe, caracterizate prin akinezie, bradikinezie, mișcări rigide și tonus muscular crescut. Nu pot mânca și bea singuri, necesitând suplimentări parenterale zilnice pentru supraviețuire. Tulburarea motorie a eliminărilor Cacna1a, precum cea a șoarecilor mai slabi, este în concordanță cu distonia generalizată.

Gust dulce și Umami

Leptină endogenă, endocannabinoizi și obezitate

Administrarea exogenă de leptină sau endocannabinoizi inhibă sau îmbunătățește răspunsurile la gustul dulce al șoarecilor slabi. Cu toate acestea, contribuția leptinei endogene și a endocannabinoizilor la sensibilitatea la gustul dulce nu a fost elucidată în aceste studii. Prin administrarea unui antagonist al leptinei sau antagonistului CB1, s-a investigat efectul leptinei endogene și al endocanabinoizilor asupra gustului dulce (Niki și colab., 2015).

La șoarecii slabi de control, răspunsurile nervoase CT la compușii dulci au fost crescute prin administrarea a 1 μg/g de greutate corporală a antagonistului leptinei (mutantul triplu al leptinei L39A/D40A/F41A), care este acțiunea opusă a leptinei. Evoluția în timp a efectului antagonist al leptinei a fost similară cu cea a leptinei; a început să crească la 10 minute după injectare, a atins maxim 30 de minute după injecție și a revenit la nivelul inițial 60-120 min după injecție. Nivelurile de leptină plasmatică sunt mai mici la șoarecii lipsiți de hrană de 24 de ore (aproximativ 2,5 ng/mL) decât la șoarecii hrăniți normal (5 ng/mL). În conformitate cu nivelul de leptină plasmatică, răspunsurile nervoase CT la îndulcitori au fost mai mari la șoarecii cu post decât la șoarecii hrăniți normal. Scăderea nivelului de leptină plasmatică la șoarecii la jeun poate duce la diminuarea efectului administrării antagonistului leptinei asupra răspunsurilor dulci. Aceste descoperiri indică faptul că leptina endogenă poate controla sensibilitatea la gustul dulce la șoarecii slabi de control. Atât în ​​răspunsurile nervoase gustative, cât și în răspunsurile celulelor gustative, leptina și-a exercitat efectul de la aproximativ 2 la 10 ng/ml (Kawai și colab., 2000; Yoshida și colab., 2015). Prin urmare, leptina poate fi capabilă să regleze sensibilitatea la gustul dulce în cadrul acestui nivel plasmatic de leptină la șoarecii slabi.

Șoarecii devin obezi hrănindu-se cu o dietă bogată în grăsimi (HFD, 60% kcal sub formă de grăsime) timp de câteva săptămâni (Hariri și Thibault, 2010). Astfel de șoareci model de obezitate indusă de dietă (DIO) au fost folosiți pentru a analiza efectul leptinei endogene și endocannabinoizilor asupra gustului dulce în cursul obezității (Niki și colab., 2015). Șoarecii DIO au arătat un nivel crescut de leptină plasmatică, prelungind perioada de hrănire cu diete bogate în grăsimi. Corespunzător unei creșteri a nivelului plasmatic de leptină, efectul antagonistului leptinei asupra răspunsurilor dulci a scăzut treptat; a început să scadă la 4-6 săptămâni de hrănire HFD și aproape a dispărut la 8-12 săptămâni de hrănire HFD. În mod similar, efectul dulce supresiv al leptinei a dispărut în celulele gustative dulci ale șoarecilor DIO care hrăneau HFD timp de 12 săptămâni (Yoshida și colab., 2015). Aceste descoperiri indică faptul că celulele gustative dulci-sensibile devin rezistente la leptină în cursul dezvoltării obezității prin hrănirea cu HFD. Pe de altă parte, efectul AM251 a început să fie observat odată cu dezvoltarea rezistenței la leptină (Niki și colab., 2015). Pe scurt, modulatorul bazal dominant pentru gustul dulce s-ar trece de la leptină la endocannabinoizi în timpul dezvoltării obezității (Fig. 4).

Figura 4. Efectul leptinei endogene și endocannabinoidului asupra șoarecilor slabi și obezi. Administrarea antagonistului leptinei este eficientă la șoarecii slabi, dar efectul său scade treptat odată cu creșterea nivelului de leptină plasmatică la șoarecii DIO. În schimb, administrarea AM251 nu are niciun efect asupra răspunsurilor dulci la șoarecii slabi, dar efectul său crește treptat în timpul dezvoltării obezității. Prin urmare, modulatorul bazal dominant pentru gustul dulce s-ar trece de la leptină la endocannabinoizi în timpul dezvoltării obezității.

Modele de animale pentru a studia urolitiaza

3.2.3 Sindromul metabolic

O investigație recentă a analizat șoarecii cu deficiențe ale genei Leptin și sindromul metabolic (Ob/Ob) în comparație cu șoarecii de tip sălbatic (slabi) și modul în care o dietă bogată în grăsimi, în combinație cu inducția hiperoxaluriei, a afectat producția de cristale (Taguchi și colab., 2015 )). Agentul litogen a fost de 1% EG în apa de băut și dietele constau fie în grăsimi standard (10%), fie cu conținut ridicat de grăsimi (62%). Rezultatele au demonstrat că șoarecii Ob/Ob atât pe EG, cât și pe o dietă bogată în grăsimi au demonstrat nu numai hipercalciurie și hiperoxalurie, ci și depozite difuze de cristal renal CaOx în spațiile intratubulare ale cortexului renal medular (Taguchi și colab., 2015). Acest studiu a constatat, de asemenea, un număr mai mare de macrofage asociate cu acești șoareci Ob/Ob, consolidând rezultatele studiilor anterioare care au descoperit macrofage renale asociate cu formarea cristalelor la șoarece (Okada și colab., 2009). Adevărata natură a acestei relații dintre macrofage și formarea cristalelor rămâne un domeniu de studiu viitor.

Modele de șoareci de tip Ataxia episodică 2

Samuel J. Rose, Ellen J. Hess, în Tulburări de mișcare (ediția a doua), 2015

52.2.3 Tulpini proiectate

Obezitate și astm: Ce am învățat din modelele animale?

Răspunsuri pulmonare la O3 la șoareci obezi

Răspunsurile pulmonare la O3 sunt, de asemenea, mai mari la șoarecii obezi comparativ cu șoarecii slabi de tip sălbatic. Creșterile rezistenței pulmonare bazale (RL) induse de O3 sunt mai mari la obezi comparativ cu șoarecii slabi, iar magnitudinea AHR indusă de O3 este mai mare și la șoarecii obezi versus șoareci slabi [14-22]. Aceste efecte sunt observate la șoarecii obezi ca urmare a unei deficiențe genetice în leptină, un hormon de sațietate (șoareci ob/ob); o deficiență genetică în izoforma lungă a receptorului de leptină (șoareci db/db); o deficiență genetică a carboxipeptidazei E (Cpe), o enzimă implicată în procesarea prohormonilor și proneuropeptidelor implicate în satietate și cheltuieli energetice (șoareci cu grăsime Cpe); și consumul unei diete bogate în grăsimi. Mărimea AHR indusă de O3 este mai mare la obezi comparativ cu șoarecii de tip sălbatic, indiferent dacă metacolină sau serotonină este utilizată ca agonist de bronhoconstricție, o observație care demonstrează natura nespecifică a AHR la șoareci obezi [17]. .

Efectele toxice ale O3 sunt inițiate în urma leziunii celulelor epiteliale, care este cauzată de radicalii liberi generați după ce O3 reacționează cu lipidele din plămâni și fluidul de căptușeală a căilor respiratorii [23, 24]. Leziunea celulelor epiteliale induce un răspuns inflamator care include generarea de multe citokine și chemokine în fază acută. Expunerea la O3 crește concentrațiile de lichid bronhoalveolar (BAL) ale acestor mediatori inflamatori într-o măsură mai mare la șoarecii obezi comparativ cu șoarecii slabi [14-22]. Mulți dintre acești mediatori promovează migrația neutrofilelor către plămâni, iar creșterile induse de O3 ale neutrofilelor BAL sunt de obicei mai mari la șoarecii obezi comparativ cu șoarecii slabi [14-22, 25]. .

Amploarea și durata obezității pot contribui la schimbări legate de obezitate în răspunsurile pulmonare la O3. La șoarecii cu grăsime CPE, chiar și o creștere cu 25% a masei corporale față de controalele de tip sălbatic, potrivite pentru vârstă, este suficientă pentru a crește indicii BAL de inflamație pulmonară după expunerea acută la O3 [16]. În schimb, la șoarecii cu obezitate indusă de dietă (DIO) indusă de consumul unei diete bogate în grăsimi timp de 16-19 săptămâni (săptămână), o creștere cu 37% a masei corporale este insuficientă pentru a spori inflamația pulmonară indusă de O3. Cu toate acestea, consumul unei diete bogate în grăsimi pentru o durată mai lungă (26-35 săptămâni) mărește efectele O3 asupra răspunsurilor pulmonare [14], chiar dacă greutatea suplimentară câștigată în perioada mai extinsă de consum a unei diete bogate în grăsimi a fost foarte mic (2%).

Interleukina (IL) -33, IL-17A și factorul de necroză tumorală (TNF) -α se numără printre citokinele și chemokinele eliberate în plămâni de către O3 [18, 26]. În plus, concentrațiile BAL ale multor dintre aceste citokine sunt mai mari la obezi comparativ cu șoarecii slabi după expunerea la O3 [18, 19]. Deoarece fiecare dintre aceste citokine are și capacitatea de a spori capacitatea de reacție a căilor respiratorii și de a promova recrutarea neutrofilelor către plămâni [27-29], evenimente care apar și după expunerea la O3 [30], un număr de investigatori au examinat rolurile acestor citokine în răspunsurile augmentate la O3 observate la șoareci obezi.

Glucagon Like Peptide 2 (GLP-2) (

Georgios K. Dimitriadis, Alexander D. Miras, în Enciclopedia bolilor endocrine (ediția a doua), 2018

GLP-2 și homeostaza glucozei

Noi dovezi obținute de la șoareci KO specifici țesutului GLP-2R indică faptul că GLP-2R în neuronii POMC este esențială pentru suprimarea producției hepatice de glucoză (Shi și colab., 2013). Într-adevăr, șoarecii lipsiți de GLP-2R selectiv în neuronii POMC prezintă o toleranță la glucoză postprandială afectată și rezistență la insulină hepatică (prin gluconeogeneză crescută), sugerând o semnificație fiziologică a acțiunii neuronale GLP-2 în controlul glicemic. Mai mult, infuzia intracerebroventriculară de GLP-2 crește toleranța la glucoză și sensibilitatea la insulină și suprimă producția bazală de glucoză hepatică prin activarea GLP-2R în neuronii POMC (Shi și colab., 2013). Prin urmare, GLP-2 a fost propus ca un semnal neuroendocrin crucial pentru homeostazia glucozei (Guan, 2014). Va fi crucial să se determine dacă CNS GLP-2R este un factor cheie pentru controlul glicemic și sensibilitatea la insulină, de asemenea, la om.