Subiecte

24-27 august 2013, Snowmass, Colorado Comitetul de organizare: Charles Ducsay, Ph.D. (co-președinte), Universitatea Loma Linda Sean Limesand, dr. (co-președinte), Universitatea din Arizona Denise Hemmings, Ph.D., Universitatea din Alberta Anna Grazul-Bilska, Ph.D., North Dakota State University

aspensnowmass

Conferința de biologie perinatală Aspen/Snowmass este o întâlnire de cercetare multidisciplinară care reunește medici și oameni de știință, anchetatori începători superiori și juniori și studenți absolvenți pentru a raporta și a discuta descoperirile lor într-o atmosferă conductivă pentru un schimb franc, dar amiabil. Scopul general este de a dezvolta interacțiuni științifice transdisciplinare eficiente care să ducă la cercetări transnaționale productive în cercetarea științei perinatale în domeniile programării fetale a bolilor adulte, preeclampsiei și obezității materne și diabetului în timpul sarcinii.

Declarație de sponsorizare

Publicarea acestui supliment a fost sponsorizată de Școala de Medicină a Universității Loma Linda.

Sesiune poster 1 - Fetus, neonat și copil

1-1. HIPERINSULINEMIA CRONICĂ SUPPRIMĂ SECREȚIA DE INSULINĂ STIMULATĂ CU GLUCOZĂ (GSIS), DAR NU β-MASA CELULARĂ, ÎN FETUL OVIN

S Andrews 1, L Brown 2, S Thorn 2, M Davis 3, S Limesand 3, W Hay Jr. 2 și P Rozance 2

Departamente de 1 OB/Gyn și 2 Pediatrie, Universitatea din Colorado, Aurora, CO, SUA. 3 Școala de științe biomedicale animale și comparative, Universitatea din Arizona, Tucson, AZ, SUA

Restricția creșterii intrauterine este asociată cu scăderea secreției de insulină fetală și a masei celulare β. Insulina are acțiuni autocrine care sporesc secreția de insulină și creșterea celulelor β, dar acest lucru nu a fost demonstrat la fătul în creștere normală. Am testat ipoteza că hiperinsulinemia fetală cronică, cu euglicemie, crește masa GSIS și a celulelor β la fătul ovin. Făturile ovine Singleton la 125,6 ± 0,5 zile de gestație (termen = 148) au fost perfuzate intravenos cu insulină (INS, HumulinR, n = 8) pentru a produce concentrații ridicate de insulină fiziologică și glucoză pentru a menține euglicemia sau soluție salină (SAL, n = 9) pentru 6-10 zile. Au fost măsurate pH-ul arterial fetal, conținutul de oxigen, glucoză, insulină, cortizol și noradrenalină. În ultima zi, GSIS fetal a fost măsurat utilizând o clemă hiperglicemică fetală cu undă pătrată. Pancreasul a fost fixat pentru analiza histologică. La patru animale INS suplimentare, GSIS a fost măsurat cu și fără blocare adrenergică farmacologică concomitentă. Concentrațiile de glucoză au fost similare (18,21 ± 1,85 INS vs. 20,21 ± 1,31 SAL, mg/dL). Conținutul de oxigen a fost mai mic (2,53 ± 0,25 vs. 3,60 ± 0,11 SAL, mmol/L, p 1, L Brown 1, S Andrews 2, S Thorn 1, W Hay Jr. 1 și P Rozance 1

Departamentul de 1 Pediatrie și 2 OB/GYN, Universitatea din Colorado, Aurora, CO, SUA

Insulina este necesară pentru creșterea fetală normală. Cu toate acestea, hiperinsulinemia fetală experimentală cronică nu crește traiectoria de creștere dincolo de normal. Mecanismele responsabile de acest paradox sunt necunoscute. Calea de semnalizare mTOR este centrală pentru reglarea creșterii fetale, sinteza proteinelor și este activată prin stimularea acută a insulinei; făcând din aceasta o cale de studiu. Obiectivul nostru a fost de a determina dacă hiperinsulinemia fetală cronică ar activa calea mTOR în mușchiul scheletal al ovinelor fetale. Făturilor de oaie Singleton li s-au administrat insulină intravenoasă continuă și glucoză pentru a menține hiperinsulinemia euglicemică (INS n = 7) sau soluție salină (SAL n = 8) timp de 7-9 zile. S-au măsurat glucoza fetală, aminoacizii, insulina, norepinefrina, cortizolul, IGF-1, pH, lactat, CO2 și O2. Biopsia mușchiului biceps femoral al membrului posterior a fost obținută în condiții de studiu la 134 de zile (termen 148 zile). Proteinele musculare au fost preparate și p70S6K, 4E-BP1 total și fosforilat, proteina ribozomală S6 (rpS6) și actina au fost măsurate prin Western blot. Concentrațiile de insulină au fost cu 150% mai mari în grupul INS comparativ cu SAL (P 1,3, S Louey 1,2,3, PJ Stork 1,4, GD Giraud 1,2,3,5, KL Thornburg 1,2,3

1 Centrul de Cercetare a Inimii, 2 Departamentul de Fiziologie și Farmacologie, 3 Institutul Cardiovascular Knight, 4 Institutul Vollum, Oregon Health & Science University, Portland, OR, SUA, 5 Portland Veterans Affairs Medical Center, Portland, OR, SUA

Maturarea cardiomiocitelor fetale implică trecerea de la o stare proliferantă la o stare neproliferantă diferențiată terminal. Cardiomiocitele fetale ovine încep procesul de maturare după vârsta gestațională de 100 de zile (dGA) astfel încât la termen (145dGA)

60% din cardiomiocite devin binucleate. Creșterea nivelului hormonului tiroidian pe termen scurt (T3) inhibă proliferarea și determină maturarea miocitelor, opunându-se stimulării proliferării de către factorul de creștere asemănător insulinei (IGF-1). Cu toate acestea, nu se cunoaște gradul în care modelele de semnalizare intracelulară se modifică odată cu maturizarea miocitelor atunci când sunt expuse acestor hormoni. Am emis ipoteza că T3 și IGF-1 ar putea activa kinaza de reglare extracelulară (ERK) și proteinele de semnalizare AKT în mod similar între 100 și 135dGA. Cardiomiocitele au fost izolate enzimatic de la oile fetale neinstrumentate, controlate (n = 11/vârstă, Ovis aries; rasă mixtă occidentală) la 102 ± 3dGA și 135 ± 1dGA. Proliferarea prin absorbția BrdU (10μM) a fost efectuată în prezența T3 (0,37, 1,5nM), IGF-1 (1μg/ml) și a inhibitorilor căii (U0126 10μM, LY294002 10μM, Rapamicină 10nM). Western blot și imunohistochimia au fost utilizate pentru a determina fosforilarea ERK, AKT și p70S6K. IGF-1 a stimulat proliferarea la ambele vârste; adăugarea T3 a suprimat activitatea mitotică la niveluri aproape bazale (

Reducere de 50% în 100dGA și

Reducere de 75% în 135dGA; p 1, JS Haring 1, RP Aitken 2, JS Milne 2, DJ Carr 2,3, AL David 3, JM Wallace 2 și JS Caton 1

1 Centrul pentru nutriție și sarcină, Departamentul de științe animale, Universitatea de Stat din Dakota de Nord, Fargo; 2 Rowett Institute of Nutrition and Health, Universitatea din Aberdeen, Scoția, Marea Britanie; 3 Grupul de terapie celulară și genetică prenatală, UCL Institute for Women’s Health

1-9. VITAMINA D ATENUAZĂ RĂNIȚILE MUNCULUI ȘI ÎMBUNĂTĂȚIE SURVIVIREA LA ȘOBOLANII PENTRU SUCCES DUPĂ EXPUNEREA DE ENDOTOXINĂ ANTENATALĂ

EM Mandell, GJ Seedorf, J Gien, SH Abman

Pediatric Heart Lung Center, Departamentul de Pediatrie, Universitatea din Colorado, Facultatea de Medicină, Aurora, CO

Corioamnionita contribuie la patogeneza BPD. Vitamina D (Vit D) are proprietăți imunomodulatoare și antiinflamatorii, dar nu se cunoaște dacă Vitamina D poate îmbunătăți supraviețuirea neonatală, poate păstra creșterea vasculară și alveolară pulmonară și poate preveni leziunile endoteliale după expunerea la inflamația prenatală. Acest studiu a fost conceput pentru a determina dacă tratamentul cu Vit D poate îmbunătăți supraviețuirea și păstra creșterea pulmonară după expunerea prenatală la endotoxină (ETX). Șobolanii fetali au fost expuși la ETX (10 μg), ETX + Vit D (1ng/ml) sau ser fiziologic prin injecție intraamniotică (IA) și livrați două zile mai târziu. Puii nou-născuți expuși la IA ETX au primit zilnic injecții cu Vit D sau ser fiziologic timp de 2 săptămâni. Pentru a evalua dezvoltarea pulmonară, numărul alveolar radial (RAC) a fost evaluat la 14d. Celulele endoteliale ale arterei pulmonare ovine fetale (PAEC) au fost evaluate pentru creșterea și formarea tubului după tratamentul cu Vit D (100-400nM) sau ETX (1ng/ml) + Vit D. Creșterea celulelor alveolare de tip II (AT II) tratate cu Vit S-a evaluat D (100nm) sau cu ETX (10ng/ml) + Vit D. Tratamentul prenatal cu Vit D a îmbunătățit supraviețuirea la puii de șobolan expuși la IA ETX în comparație cu expunerea la ETX singur (100% față de 60%; p 1, JS Caton 1, PP Borowicz 1, KA Vonnahme 1, CO Lemley 1 și AJ Conley 2

1 Centrul pentru nutriție și sarcină, Departamentul de științe animale, Universitatea de Stat din Dakota de Nord, Fargo; 2 Departamentul de sănătate și reproducere a populației, Universitatea din California-Davis

1-12. ȚESUTUL DE ADIPOZĂ MARO CLAVICULAR OVIN PENTRU O ORIGINĂ DIFERITĂ DIN DEPOTUL PERIRENAL, CARE ESTE INDICATIV PENTRU LINIA LEGATĂ DE MUSCUL

ME Symonds, M Pope, M Birtwistle, V Perry și H Budge

Divizia Academică de Sănătate a Copilului, Școala de Medicină, Universitatea din Nottingham, Nottingham, NG7 2UH, Regatul Unit

1-13. Dovezi pentru creșterea activității CICLULUI CORI ÎN FETUL IUGR

S Thorn, P Rozance, J Friedman, W Hay, L Brown

Facultatea de Medicină a Universității din Colorado, Aurora, CO, SUA

1-14. DEFICIENȚE INTRINSICE ÎN PROLIFERAREA MYOBLAST REZULTAT ÎN MYOBLASTS MIC DIFERENȚIAȚI ȘI MYOFIBERI MAI MICI ÎN OEA FETALĂ IUGR

DT Yates, AR Macko și SW Limesand

Departamentul de Științe Animale, Universitatea din Arizona, Tucson, AZ, SUA

Creșterea restrânsă a mușchilor scheletici în gestație târzie și după naștere este asociată cu restricție de creștere intrauterină (IUGR). Obiectivul acestui studiu a fost de a determina dacă proliferarea deficitară a mioblastelor contribuie la reducerea dimensiunii mușchilor scheletici la ovinele fetale IUGR pe termen scurt. În comparație cu martorii, fetușii IUGR au fost cu 67% mai ușori (P

Poster Sesiunea 2 - Reglementarea maternă și placentară

2-1. DIETE, DAR NU TRATAMENTUL CU ARGININA (ARG), AFECTEZĂ LEPTINA, INSULINA ȘI CONCENTRAȚIILE SERULUI PROGESTERONIC (P4) ÎN OCHII NEGRAVANTE

CS Bass 1, DA Redmer 1, SL Kaminski 1, DH Keisler 2, PP Borowicz 1, ST Dorsam 1, JS Haring 1 și AT Grazul-Bilska 1

1 Departamentul de Științe ale Animalelor, Universitatea de Stat din Dakota de Nord, Fargo, ND și 2 Universitatea din Missouri, Columbia, MO, SUA

Scopul acestui studiu a fost de a determina efectele dietei cu sau fără supliment de Arg asupra producției de leptină, insulină și P4. Oile au fost repartizate aleatoriu în trei grupuri diferite de nutriție; control (C; n = 24; 2,14 Mcal/kg), supraalimentat (O; n = 27; 2xC), sau subalimentat (U; n = 31; 0,6xC) și au fost hrăniți cu o dietă specifică timp de 60 de zile înainte de Arg- tratament. Estrus a fost sincronizat folosind CIDR-uri timp de 14 zile. După retragerea CIDR (cu o zi înainte de estul așteptat; d0), oile din fiecare grup de nutriție au fost repartizate aleatoriu la unul din cele două tratamente: Arg (L-Arg HCl, 155 µmol/kgBW) sau soluție salină

10 ml) administrat de 3 ori/zi de la d0 prin colectarea țesuturilor. Probele de sânge au fost colectate pe d0 (estrus), 10 (faza mid-luteală), 21 (faza luteală timpurie) și 26 (faza mid-luteală) de tratament Arg pentru evaluarea concentrației serice de leptină, insulină și P4 utilizând radioimunotest sau imunoanaliză enzimatică chimiluminiscentă competitivă. Pentru leptină, a existat un efect dietetic (P 1, R Saxena 2, C Anderson 3, G Falcon 1, C Martin 1, B Castillo 4, K Keplin 1, N Pearson 1, F Lamb 1, S Bercier 1, B Keating 4

1 Turtle Mountain Community College, Belcourt, ND, SUA, 2 Massachusetts General Hospital, Boston, MA, SUA, 3 University of North Dakota, Grand Forks, ND, SUA, 4 The Children's’s Hospital din Philadelphia, Philadelphia, PA, SUA

1 Departamentul de științe animale, Universitatea de stat din Dakota de Nord, Fargo 2 Departamentul de științe animale și lactate, Universitatea de stat din Mississippi, Statul Mississippi, MS, SUA

2-4. STRESUL NITRATIV INHIBITĂ SECRETAREA GONADOTROPINEI CORIONICE UMANE (HCG) PRIN CITOTROFOBLASTELE PLACENTALE

P Diaz, CP Sibley și SL Greenwood

Centrul de cercetare a sănătății materne și fetale, Universitatea din Manchester, Manchester, Regatul Unit

Reglarea reînnoirii sinciotrofoblastului (STB) prin rotire celulară este esențială pentru o sarcină de succes. hCG este un important regulator autocrin/paracrin al cifrei de afaceri STB. Preeclampsia este asociată cu reînnoirea STB anormală și cu stresul nitritiv crescut. Aici testăm ipoteza că expunerea cronică la stresul nitrativ reglează secreția și multinucleația de citotrofoblasti hCG. Citotrofoblastele au fost izolate din placente cu termen normal (n = 7) și cultivate timp de 66 ore. Acest preparat recreează formarea STB in vivo, deoarece celulele mononucleate (15h) fuzionează în sincitiile multinucleate (66h) concomitent cu secreția crescută de hCG. Celulele au fost netratate (martor) sau tratate la 3, 15 și 42 de ore cu ONOO- (0,1 mM) sau ONOO- generator de 3-morfolinosidonimină (SIN-1; 0,5 mM). La 15, 42 și 66h, mediul de cultură a fost colectat pentru a măsura hCG (mIU/ml/mg proteină) și celule fixate pentru imunofluorescență cu anticorp anti-desmoplakin pentru a evalua multinucleația (nuclei sincițiali ca% din totalul nucleilor). Multinucleația citotrofoblastului a crescut de 10 ori (p 1, T Quinn 1, D Walker 1,2

1 Centrul Ritchie, Institutul de cercetare medicală Monash, 2 Departamentul de obstetrică și ginecologie, Universitatea Monash, Australia

2-6. SUPLIMENTAREA CREATINEI DIETARE MATERNĂ PREVENEȘTE DEFICITURILE PE TERMEN LUNG CAUZATE DE ASFIXIA NAȘTERII

H Dickinson 1, D LaRosa 1, S Ellery 1, E Pereleshina 1, Z Ireland 2, R Snow 3, P Temple-Smith 4 și D Walker 1,4

1 Centrul Ritchie, Institutul de cercetare medicală Monash, 2 Centrul de cercetare clinică al Universității din Queensland, Brisbane, 3 Centrul de cercetare a activității fizice și nutriționale, Universitatea Deakin, 4 Departamentul de obstetrică și ginecologie, Universitatea Monash

Folosind un model de asfixie la naștere (BA) la șoarecul spinos, am arătat că o dietă îmbogățită cu creatină de la jumătatea sarcinii îmbunătățește supraviețuirea și creșterea postnatală 1 și previne leziunile creierului 2, diafragmei 3 și ale rinichilor la vârsta de 24 de ore. Acest studiu a evaluat potențialul suplimentării materne cu creatină pentru a oferi protecție pe termen lung acestor organe și, de asemenea, a investigat efectele BA pe ovar. Barajele gravide au fost hrănite cu o dietă de control sau 5% suplimentată cu creatină din ziua de gestație 20 (termen 39 de zile). În ziua 38, puii au fost născuți prin secțiune c, sau după BA indusă prin plasarea uterului excizat care conține toți făturile într-o baie salină timp de 7,5-8 minute, după care fetusii au fost expulzați și resuscitați. Nou-născuții supraviețuitori au fost încrucișați la un baraj care alăptează până la vârsta de 33 de zile, când mușchiul diafragmatic izolat și funcția cardiacă intactă au fost evaluate in vitro, iar numărul foliculului ovarian și al nefronului au fost determinate prin stereologie imparțială. BA a dus la oboseală crescută și la forța tetanică maximă redusă a mușchiului diafragmului și la contractilitatea cardiacă afectată, cu presiunile diastolice finale rămase la

20 mmHg, comparativ cu comenzile potrivite pentru vârstă. BA a redus rezerva foliculară ovariană cu 32%, efect minimizat (20%) la femele de la mamele hrănite cu creatină. Calculele preliminare ale numărului de nefroni arată un deficit semnificativ după BA, efectele creatinei rămân de determinat. Asfixia a indus compromisul diafragmei și funcției cardiace, numărul de nefron și rezerva foliculară ovariană persistă până la vârsta de cel puțin 33 de zile, efecte prevenite/minimizate de încărcarea creatinei materne în timpul sarcinii. 1 Ireland Z și colab. Am J Obstet Gynecol 2008; 198: 431 e1-6; 2 Ireland Z și colab. Neuroștiințe 2011; 194: 372-9; 3 Cannata DJ și colab. Pediatr Res 2010; 68: 393-8; 4 Ellery S, și colab. Pediatr Res 2013; 73 (2): 201-8.

2-7. SUPLIMENTAREA ARGININEI PROTEJATE DE RUMEN ALTERĂ HEMODINAMICA ARTEREI CAROTIDE ÎN EWES

K Egeland 1, JL Peine 1, EE Gaspar 1, ME Kapphahn 1, NM Chapel 1, PP Borowicz 1, AM Meyer 2, LP Reynolds 1 și JS Caton 1

1 Departamentul de Științe Animale și Centrul pentru Nutriție și Sarcină Universitatea de Stat din Dakota de Nord, Fargo 2 Departamentul de Științe Animale, Universitatea din Wyoming, Laramie

2-8. EFECTUL TRICLOSANULUI PE EXPRIMAREA GENEI GLOBALE ÎN PLACENTA OVINĂ DE GESTARE TARZIE

A Grapes, MB Rabaglino și CE Wood

Departamentul de științe animale, Departamentul de fiziologie și genomică funcțională, Universitatea din Florida Colegii de agricultură și științe ale vieții și medicină

1 Centrul de Cercetare pentru Sarcină și Nou-Născut, Departamentul de Ob/Gyn, Universitatea din Texas Health Science Center din San Antonio, Texas, SUA, 2 Departamentul de Informatică, Universitatea din Texas din San Antonio, Texas, SUA

2-12. GENERAȚIA DE CELULE SIMILARE CITOTROFOBLASTULUI DIN CELULE STEM EMBRIONICE UMANE ÎN MEDIUL DEFINIT

MM Parast, Y Li, MM Zita, F Soncin, A Wakeland, LC Laurent

Departamentele de patologie și medicină a reproducerii, UC San Diego, La Jolla, CA, SUA

2-13. RESTRICȚIA DE NUTRIENȚI ÎN TIMPUL GESTIUNII TEMPORALE ȘI MEDIALE URMATĂ DE REALIMENTARE ALTERĂ VASOREACTIVITATEA ARTERIALĂ COTILEDONARĂ ÎN RĂSPUNSUL BRADICININULUI ÎN VACILE DE VIE ÎN TIMPUL TĂRII

A Reyaz 1, MS Sane 2, F Yao 3, LE Camacho 1, CO Lemley 4, KC Swanson 1, ST O'Rourke 2 și KA Vonnahme 1

1 Departamentul de Științe ale Animalelor și 2 Departamentul de Științe Farmaceutice, Universitatea de Stat din Dakota de Nord, Fargo, ND, SUA 3 Departamentul de Farmacologie BSOM, Universitatea din Carolina de Est, Greenville, NC, SUA 4 Departamentul de Științe ale Animalelor și Lactelor, Mississippi

1 Departamentul de obstetrică, Spitalul Universitar din Oslo, Norvegia, 2 Universitatea din Oslo, Norvegia

Cu scopul de a efectua studii privind proprietățile funcționale ale placentei la om, am stabilit o metodă de obținere a probelor de sânge arterial și venos de pe ambele părți ale placentei in vivo. Prezentăm datele noastre inițiale prin descrierea concentrațiilor de glucoză și a gradienților de pe ambele părți ale placentei. Studiul include femei (n = 39) cu sarcini necomplicate care suferă o operație cezariană planificată. Probele de sânge de post au fost obținute din artera radială (înlocuitor pentru artera uterină) și vena uterină chiar înainte de incizia uterină și din artera și vena ombilicale imediat după prinderea cordonului. Concentrația medie de glucoză în artera radială a fost de 4,71 mmol/L (DE 0,48), în vena uterină 4,41 mmol/L (DE 0,45), în vena ombilicală 3,87 mmol/L (DE 0,41) și în artera ombilicală de 3,48 mmol/L (SD 0,45). Gradientul de glucoză arteriovenos matern a fost 0,29 mmol/L (SD 0,23), p 1, CM Anderson 1 și JE Ohm 2

1 Colegiul de Asistență Medicală și Disciplinele Profesionale, 2 Școala de Medicină și Științe ale Sănătății, Universitatea din Dakota de Nord, Grand Forks, Dakota de Nord, SUA

Pentru a determina fezabilitatea evaluării modelelor de metilare a ADN ca factor care contribuie la grupa B streptococ (GBS), am analizat modelele de metilare a ADN-ului la nivelul genomului la nivelul globulelor albe periferice ale femeilor însărcinate cu și fără colonizare GBS pentru asocierea cu răspunsul imun. Analiza secundară a datelor de metilare a ADN-ului a fost finalizată pentru a identifica diferențele potențiale la femeile gravide cu și fără colonizare GBS la începutul sarcinii. Un criteriu delta-beta de> 0,2 sau 1000 site-uri CpG a diferit cu 20% sau mai mult la femeile GBS pozitive față de femeile GBS negative. 350 de situri CpG au rămas semnificativ diferite atunci când s-a aplicat o modificare mai strictă a metilării cu 30%. Genele cu modificări de metilare au fost asociate cu răspunsul imun, histocompatibilitate, imunoglobulină, producerea de citokine și rețeaua imună intestinală pentru producerea de IgA. Datele preliminare sugerează că modificările metilării ADN-ului în genele asociate cu funcția imunitară pot contribui la susceptibilitatea colonizării GBS. (Sprijinit de Grant International Society of Nurses in Genetics Research Grant & Midwest Nursing Research Society Dissertation Grant (MLW; Robert Wood Johnson Nurse Faulty Scholar Award (CMA, 64202))