Sanaz Bazoobandi
1- Centrul de cercetare a celulelor stem și tehnologiei transgenice, Universitatea de Științe Medicale Shiraz, Shiraz, Iran
Nader Tanideh
1- Centrul de cercetare a celulelor stem și tehnologiei transgenice, Universitatea de Științe Medicale Shiraz, Shiraz, Iran
2- Departamentul de farmacologie, Școala de medicină Shiraz, Universitatea de științe medicale Shiraz, Shiraz, Iran
Farhad Rahmanifar
3- Departamentul de Științe de bază, Școala de Medicină Veterinară, Universitatea Shiraz, Shiraz, Iran
Amin Tamadon
1- Centrul de cercetare a celulelor stem și tehnologiei transgenice, Universitatea de Științe Medicale Shiraz, Shiraz, Iran
Mohammadreza Keshtkar
1- Centrul de cercetare a celulelor stem și tehnologiei transgenice, Universitatea de Științe Medicale Shiraz, Shiraz, Iran
Davood Mehrabani
1- Centrul de cercetare a celulelor stem și tehnologiei transgenice, Universitatea de Științe Medicale Shiraz, Shiraz, Iran
Maryam Kasraeian
4- Centrul de cercetare perinatologică, Universitatea de Științe Medicale Shiraz, Shiraz, Iran
5- Departamentul de Obstetrică și Ginecologie, Școala de Medicină, Universitatea de Științe Medicale Shiraz, Shiraz, Iran
Omid Koohi-Hosseinabadi
6- Laboratory Animal Center, Universitatea de Științe Medicale Shiraz, Shiraz, Iran
Abstract
Fundal:
Sinechiile uterine sau sindromul Asherman sunt o afecțiune care poate provoca infertilitate. Prezentul studiu experimental a fost conceput pentru a stabili iepurele ca model animal pentru sindromul Asherman uman folosind chiuretajul endometrial.
Metode:
Într-un studiu experimental, femelele de iepure adulte (n = 18) au fost împărțite aleatoriu în grupuri intacte și ovariectomizate. O treime din partea caudală a ambelor uteri a fost supusă chiuretajului endometrial traumatic. Un grup a fost simultan ovariectomizat. Iepurii intacti au fost ovulația indusă artificial în decurs de 10 zile după operație. O treime din partea craniană a ambelor uteri a fost selectată ca martor. Apare sinechii, suprafață luminală/suprafață totală (LA/TA), suprafață endometrială/suprafață totală (EA/TA), suprafață miometrială și perimetrială/suprafață totală (MPA/TA), suprafață endometrială/suprafață peretelui uterin (EA/UWA), iar raporturile dintre zona miometrială și perimetrială/zona peretelui uterin (MPA/UWA) ale ambelor uteri în șase grupuri subdivizate (n = 6) au fost analizate în părți de control chiuretate și intacte. În zilele 15, 30 și 45 după intervenția chirurgicală prin test ANOVA și LSD bidirecțional (p Cuvinte cheie: Model animal, sindromul Asherman, iepure, sinechie uterină
Introducere
Metode
Animale:
Optsprezece femele adulte sănătoase din Noua Zeelandă iepuri albi (Oryctolagus cuniculus) cu o greutate de 3500-4000 g au fost selectate aleatoriu și păstrate în Centrul de Medicină Comparativă și Experimentală, Universitatea Shiraz de Științe Medicale, Shiraz, Iran. Au fost adăpostite în condiții de temperatură de 20 ± 2 ° C, umiditate 60% și ciclu de lumină/întuneric de 12 ore. Aveau acces gratuit la alimente și apă. Morcovul și pătrunjelul au fost adăugați la hrana lor pentru o suplimentare mai bună. Iepurii au fost împărțiți aleatoriu în grupuri intacte și ovariectomizate.
Procedura chirurgicala:
A) Ilustrație schematică a uterului iepurelui. Marcajele roșii prezintă incizia și chiuretajul locurilor celor două uteri, iar marcajele verzi arată locurile eșantionate de control. B) Procedura chirurgicală de chiuretaj intrauterin al uterului drept de iepure folosind un bisturiu
Gruparea iepurilor este rezumată în tabelul 1). Nouă iepuri (18 uteri) au fost simultan ovariectomizate. Iepurii intacti din al doilea grup (n = 9) au fost ovulații induse artificial cu stimulare vaginală folosind o tijă de plastic în decurs de 10 zile după operație. Iepurii au fost sacrificați cu o doză mare de pentobarbitonă (1 g, Specia ™, Franța) în diferite momente după operație (zilele 15, 30 și 45). O treime din partea caudală a ambelor uteri ca chiuretate și o treime din partea craniană a ambelor uteri ca martor și ovare ale iepurilor intacti au fost fixate prin imersiune timp de două săptămâni în tampon formalină 10%.
tabelul 1.
Grupuri din prezentul studiu pentru inducerea sindromului Asherman uman la modelul de iepure
| 15 | 6 (12) | 6 probe | 6 probe | 6 probe | 6 probe |
| 30 | 6 (12) | 6 probe | 6 probe | 6 probe | 6 probe |
| 45 | 6 (12) | 6 probe | 6 probe | 6 probe | 6 probe |
Histopatologie:
Segmentele de uteri au fost încorporate în parafină după fixare și secțiuni histopatologice au fost realizate din fiecare bloc. Secțiunile de 5 μm grosime au fost colorate cu hematoxilină și eozină și tricromul verde al lui Masson pentru a analiza daunele histopatologice în urma chiuretajului și evoluția procesului de regenerare cu trecerea timpului. Diapozitivele pentru pete de hematoxilină și eozină au fost vizualizate și fotografiate la microscopul cu lumină (Olympus, Japonia) echipat cu o cameră digitală ajustată (Dino-Eye, Taiwan). Zona lumenului, zona endometrială și aria totală a uterului au fost măsurate utilizând software-ul Dinocapture 2.0 (Dino-Eye, Taiwan; Figura 2). Proporția epiteliului luminal endometrial deteriorat a fost estimată prin calcularea diferiților indici (Tabelul 2) din ambii uteri în șase grupuri subdivizate (n = 6). Apariția sinechiilor, elementele inflamatorii și modificările histopatologice în timp au fost evaluate în chiuretaj și în părțile de control intacte prin evaluarea lamelor tricrome ale lui Masson.
Zona lumenului, A: zona endometrială; B: și aria totală (A + B + C) a secțiunilor uterine (tricromul lui Masson) au fost măsurate folosind software-ul Dinocapture 2.0
masa 2.
Indici histopatologici pentru evaluarea uterului chietat și de control în grupuri intacte și ovariectomizate pentru inducerea sindromului Asherman uman la modelul de iepure
| Raport suprafață lumen/suprafață totală corn | LA/THA |
| Raportul zonei endometriale/suprafeței totale a cornului | EA/THA |
| Raportul aria miometrială și perimetrială/aria totală a cornului | MPA/THA |
| Raportul suprafeței endometriale/peretelui uterin | EA/UWA |
| Raportul aria miometrială și perimetrială/peretele uterin | MPA/UWA |
Considerații etice:
Acest studiu prospectiv experimental a fost aprobat de Comitetul de etică pentru experimentele pe animale din Universitatea de Științe Medicale din Shiraz, Shiraz, Iran cod de număr # 92-01-85-6951.
Analize statistice:
Mijloacele și eroarea standard (SE) a raportului LA/THA, EA/THA, MPA/THA, EA/UWA și MPA/THA au fost supuse testului de normalitate Kolmogorov-Smirnov și la fiecare dată) au fost analizate prin două căi ANOVA (SPSS pentru Windows, versiunea 11.5, SPSS Inc, Chicago, Illinois) și testul post-hoc au fost efectuate prin testul LSD. Valoarea p mai mică de 0,05 a fost considerată semnificativă statistic. Mediile de grup și SE-ul lor sunt raportate în grafice (GraphPad Prism versiunea 5.01 pentru Windows, GraphPad software Inc., San Diego, CA, SUA).
Rezultate
Toți iepurii nu au avut complicații postoperatorii. După autopsie, obstrucția completă a lumenului la locul chiuretajului a două coarne uterine a fost indusă de hidrometru (Figura 3A). Rezultatele histopatologice au arătat leziuni epiteliale semnificative, împreună cu reacții inflamatorii semnificative în grupurile chiuretaj intacte și ovariectomizate (Figurile 3B, 3C, 3E și 3F) în comparație cu grupurile martor (Figurile 3D și 3G). Mai mult, secțiunile ovariene din grupele intacte cu corp lutea nu au avut foliculi secundari sau terțiari care au confirmat inducerea pseudo-sarcinii (Figura 3H).
A: Obstrucția completă a lumenului la locul chiuretajului hidrometrului indus de uter în doi uteri (hematoxilină și eozină). B: Intact și C: leziuni endometriale ale grupurilor ovariectomizate în locul chiuretajului (hematoxilină și eozină). D: Controlul secțiunii cornului uterin ovariectomizat (hematoxilină și eozină). E: Secțiunea endometrială a grupului de chiuretaj ovariectomizat (tricromul lui Masson). F: Secțiune endometrială a grupului de chiuretaj intact (tricromul lui Masson). G: Secțiunea endometrială a grupului martor intact (tricromul lui Masson). H: Prezența corpului lutean în secțiunea ovariană a grupului intact (hematoxilină și eozină)
Raporturile LA/THA uterine ale grupului de chiuretaj intact în zilele 15 și 45 au fost mai mari decât grupul martor intact în ziua 15 (p = 0,002 și, respectiv, p = 0,049, Figura 4A). Mai mult, raporturile LA/THA uterine ale grupului de chiuretaj intact au fost mai mari decât grupul de chiuretaj ovariectomizat în ziua 15 (p Figura 4A). Mai mult, raportul EA/THA al grupului chiuretaj intact în ziua 30 a fost mai mic decât grupul martor intact în ziua 30 (p = 0,036, Figura 4B). Raportul EA/THA al grupului martor intact a fost mai mare decât grupul martor ovariectomizat în ziua 30 (p = 0,034, Figura 4B). În plus, raportul MPA/THA nu s-a modificat în timpul perioadei de studiu la ambele grupuri de intacte și ovariectomizate (Figura 4C). Raportul EA/UWA și raportul MPA/UWA nu s-au modificat în timpul perioadei de studiu în ambele grupuri de intacte și ovariectomizate (Figurile 5A și 5B).
Eroarea medie și standard a indicilor histopatologici ai uterului chietat și de control la iepuri în grupuri intacte și ovariectomizate, la 15, 30 și 45 de zile după inducerea sindromului Asherman. A: Raport suprafață lumen/suprafață totală; B: Raportul suprafeței endometriale/suprafeței totale; C: Raportul aria miometrială și perimetrială/suprafața totală. a, b: Diferite litere arată diferențe semnificative între diferite zile în același grup de intacte sau ovariectomizate (p Asherman JG. Aderențe intrauterine traumatice și efectele lor asupra fertilității. Int J Fertil. 1957; 2 (1): 49–61. [ Google Academic]
- Stăpânirea fazei de inducție Keto (Ghid pas cu pas)
- Sindromul Hughes (Sindromul antifosfolipidic) Simptome și multe altele
- Cât de periculos este sindromul Marfan Dr.
- Sindromul intestinal cu scurgeri la pisici Spitalul de animale VCA
- Sindromul Hunter O cauză rară care stă la baza bolilor și afecțiunilor frecvente din copilărie