Abstract

Introducere

În materia oficială europeană medică pot fi găsite mai multe înregistrări istorice despre utilizarea terapeutică a heleborelor. În vremurile antice, regiunea Anticyra, un port de pe coasta de nord a Golfului Corint, era renumită pentru hellebori, care erau considerați ca un remediu pentru nebunie, gută și epilepsie (Encyclopaedia Britannica 1910a).

Istoricul medical al speciei este o problemă de controversă, deoarece a fost adesea confundat cu alte specii (de ex. Adonis vernalis L., Actaea spicata L., Astrantia major L.), ca rezultat al identificării botanice false. Numele lui Helleborus a fost folosit în unele cazuri pentru a descrie alte plante. Exemple tipice includ menționarea H. albus pentru Album Veratrum (Woodville 1810) sau H. niger pentru Melampodiu, care a fost numit în onoarea lui Melampus. Melampus, un străvechi păstor și vindecător mitologic, a recomandat fiicelor regelui Proetus, pentru nebunie, laptele unei capre, care fusese hrănit cu planta de hellebore (Wood și Bache 1839; Encyclopaedia Britannica 1910b). Oamenii galici au înmuiat săgețile în ellebore în timpul vânătorii (date de Plinius). În Egiptul antic specia a fost aplicată împotriva tulburărilor mentale (Rácz 2010). În medicina antică a Europei, rădăcina a fost utilizată ca medicament purgativ și pentru tulburările maniacale prin îndepărtarea bilei negre. Pentru o lungă perioadă de timp, H. niger a fost considerat „Hellebore de Hipocrate” recomandat de scriitorii de medicină antică (Woodville 1810).

În materia modernă occidentală medica H. niger L., H. orientalis Teren H. foetidus L. au fost utilizate cu diverse scopuri terapeutice în secolul al XVIII-lea - al XIX-lea. În timp ce literatura medico-farmaceutică din Europa Centrală a prezentat date în principal asupra H. niger, în referințele vest-europene H. foetidus a fost recunoscut ca drog oficial. H. niger a fost menționat ca diuretic, emmenagog și cathartic, numit medicament melanagog recomandat în obstrucțiile feminine, accidente isterice și hipocondriace, melancolie, nebunie, epilepsie, lepră și quartani inveterate în secolul al XVIII-lea (Alston 1770). De asemenea, s-a documentat că utilizarea acestuia poate duce la inflamații ale membranelor mucoase (gastrice sau intestinale), inflamații ale pielii și chiar vezicare (Wood și Bache 1839). Efectul iritant asupra mucoasei nazale a fost utilizat terapeutic prin aplicarea pulberilor sternutatoare (strănut), inclusiv a rizomului praf de H. niger și H. viridis L. (Magyary-Kossa 1926).

Rizomul H. niger a fost utilizat pentru efectul său digitalic, ca agent diuretic și cardiotonic în terapia umană și pentru efectul diuretic în medicina veterinară, în timp ce cel al H. viridis ca medicament emetic, laxativ și antihelmintic (Jirásek și colab. 1957).

În secolul trecut și în prezent, rădăcina și rizomul înțepător și amar (Sadler 1824; Borza 1968) au fost utilizate pe scară largă ca aspecte ale medicamentelor imunostimulante în medicina etnoveterinară europeană: au fost aplicate pentru pneumonie și tuse la porci, vaci și cai. . (Kóczián și colab. 1975, 1976; Halászné 1981, 1987; Péntek și Szabó 1985; Gub 1993, 1996, 2000; Bárdi și colab. 2002; Pieroni și colab. 2004; Szabó 2005; Babai 2013), împotriva congestiei nazale a cai (Pieroni și colab. 2013), pentru helmintiază (Butura 1979) și gătite și amestecate cu grăsime pe fața animalelor (Gub 1993). Frunza a fost cunoscută pentru reumă ca un foment (Halászné 1981, 1987) și înmuiată în furajele porcilor împotriva pneumoniei și a tusei (Kóczián et al. 1976).

Utilizarea medicală tradițională și oficială a Specii de Helleborus se bazează în principal pe chimia unor componente ca resurse genetice. Dintre aceștia, helele sunt bogate în compuși activi din punct de vedere structural care sunt responsabili pentru o varietate de efecte farmacologice (Cioca și Cucu 1974; Milbradt și colab. 2003; Szabó 2005), de ex. glicozide cardiace, saponine steroidiene, ecdisone și protoanemonină (Szabó 2005). Saponinele steroidale au o diversitate structurală largă, atât ca structură a scheletului furostan, cât și a spirostanului (Challinor și colab. 2012; Maior și Dobrotă 2013). Concentrația helleborinei, cel mai cunoscut glicozid cardioactiv al helleborilor, sa dovedit a fi mai mare în H. purpurascens Waldst. et Kit. comparativ cu H. odorus Waldst. et Kit. și H. viridis (Wissner și Kating 1974; Szabó 2005).

Profilul chimic al unor părți ale heleborilor se poate modifica chiar și în diferite etape fenologice; de exemplu. nivelul antocianinelor, flavonolilor și clorofilei a prezentat diferențe semnificative în diferite stadii de dezvoltare ale sepalelor în H. niger (Schmitzer și colab. 2013).

Speciile de helebor au potențial antioxidant (Păun-Roman și colab. 2010; Apetrei și colab. 2011; Čakar și colab. 2011) și pot fi utilizate pentru insuficiența cardiacă în terapia umană sub control medical (Szabó 2005), pentru diferite boli ale sistemul imunitar (Szabó 2005; Horstmann și colab. 2008; Littmann și colab. 2008; Neacșu și colab. 2010), ca agenți antitumorali (Vochita și colab. 2011), pentru diabet, eczeme, dureri de dinți și artrită (Maior și Dobrotă 2013).

Deoarece majoritatea cercetărilor s-au concentrat asupra trăsăturilor chimice și farmacologice ale helleborilor (Cioca și Cucu 1974; Stochmal și colab. 2010; Yang și colab. 2010; Vitalini și colab. 2011; Milbradt și colab. 2003) și doar un număr limitat numărul de lucrări abordate probleme structurale (Vesprini și colab. 1999, 2012; Šušek 2008; Barkyna și Churikova 2014; Rottensteiner 2016; Kumar și Lalitha 2017), munca noastră a vizat evidențierea variabilității în anatomia a trei Helleborus specii. Deși structura țesutului organelor vegetative și a florii - cuprinzând sepale colorate de petale, petale modificate în nectare și inele interioare de stamine și pistili - este destul de constantă în gen (Tamura 1993; Dános 2006), ar putea exista mici diferențe în ceea ce privește morfologia și anatomia tulpinii, a frunzelor frunzelor și a organelor florale la diferite specii. Terminologia utilizată pentru descrierea diferitelor părți florale variază în funcție de diferiți autori: vârful exterior al florii este denumit fie pur și simplu periant (Salopek-Sondi 2011), sepal (Šušek 2008; Salopek-Sondi 2011) sau tepal (Vesprini și colab. 1999; Rottensteiner 2016); în timp ce termenul folosit pentru structura producătoare de nectar este fie nectar (Vesprini și colab. 1999, 2008, 2012; Koteyeva 2005), fie petală (Šušek 2008).

Ne-am organizat cercetarea în jurul a două obiective, pentru a completa lacune în cunoștințele noastre legate de diverse Helleborus specii. Primul obiectiv a fost să însumăm datele etnobotanice ale H. purpurascens colectate în Transilvania (România) și comparați-le cu înregistrările anterioare ale helelor în Transilvania și alte țări europene. Al doilea scop a fost de a oferi o analiză histologică detaliată a părților vegetative și generative ale H. odorus și H. purpurascens, care sunt originare din Ungaria, și cele din H. niger ca specie cultivată, concentrându-se pe asemănările și diferențele părților menționate etnomedicinal.

Materiale și metode

Zonă de studiu

Sondajul etnobotanic a fost realizat în satele Homorod (popor secuiesc), Ghimes și valea Uz (Csángós), fiecare situat în Transilvania, România, în perioada 2007-2018.

Valea Homorod este situată în sud-estul Transilvaniei, înconjurată de munți. Székelys trăiesc din practici agricole și animale ca fermieri și păstori în Lueta (valea Homorod). Csángó din Cinod și Eghersec (valea Uz) și Lunca de Sus (munții Ghimeș) trăiesc, de asemenea, ca furnizori independenți de activități pastorale și produse lactate. Deși Lueta și Lunca de Sus sunt furnizate de servicii medicale și farmaceutice, oamenii aplică frecvent diferite tratamente la domiciliu pentru probleme de sănătate umană și veterinară care implică în principal materiale de origine vegetală, similar cu Cinod și Eghersec. Această zonă are un interes etnobiologic deosebit datorită populației sale maghiare Szekely (Hung. Székely; Rom. Secui) și Csango (Hung. Csángók, Rom. Ceangăi). Ambele reprezintă două grupuri etnografice maghiare destul de arhaice, păstrând multe tradiții culturale medievale.

Muncă de teren etnobotanică

Informatorii 45 Székely și 62 Csángó solicitați aveau vârste cuprinse între 62 și 91 de ani. Vorbesc în limba maghiară, ceea ce a facilitat comunicarea în timpul interviurilor. Interviurile semi-structurate au durat 60-120 min (în total 80 h), au inclus întrebări despre numele local (în cursiv), habitatul, metoda de recoltare și timpul diferitelor plante medicinale, inclusiv hellebore, precum și metoda de preparare, utilizare și tulburări tratate. A fost obținut consimțământul informat prealabil pentru efectuarea interviurilor și au fost aplicate liniile directoare etice ale Societății Internaționale de Etnobiologie (ISE 2007). Datele au fost documentate cu note scrise de mână, înregistrare pe bandă și fotografii. Observațiile personale în câmpuri au fost completate prin colectarea plantelor, apoi exemplarele de voucher au fost depuse la Departamentul de Farmacognozie, Universitatea din Pécs. Nomenclatura științifică a heleborelor a urmat lucrarea sistematică a lui Tutin și colab. (2010).

Analiza datelor etnobotanice

O căutare a studiilor etnomedicinale asupra helleborilor a fost efectuată în baze de date (PubMed, Science Direct și Scopus). Datele noastre colectate au fost comparate cu înregistrările documentate anterior în Transilvania și alte țări europene din secolul al XVI-lea, concentrându-se în principal pe cele obținute din secolul trecut. În timpul comparației, asemănările și diferențele datelor au fost luate în considerare.

Colectare de probe pentru studiu histologic

Rădăcina și părțile aeriene ale H. odorus au fost colectate într - o pădure de stejar de pe dealurile Mecsek din sudul Ungariei, cele din H. purpurascens în Grădina Botanică, Universitatea din Pécs, Ungaria, și cele din H. niger în Grădina Plantelor Medicinale a Facultății de Farmacie, Universitatea de Științe Veterinare și Farmaceutice Brno, Republica Cehă în 2016. Rădăcina, tulpina, frunza, pețiolul și florile, inclusiv sepalul, nectarul, antera, filamentul și pistilul fiecărei specii au fost tăiat în bucăți de 1 cm și fixat într-un amestec de etanol 96%: glicerină: apă (1: 1: 1), până la o analiză suplimentară.

Studiu histologic

Probele au fost deshidratate în serie de etanol (în 30%, 50%, 70% și 96% timp de 12, 12, 24 și respectiv 3 ore), infiltrate cu soluția Technovit 7100 și în cele din urmă încorporate într-o rășină care conține metacrilat de hidroxietil. Secțiunile transversale (10 μm grosime, 18-20 lame pentru fiecare parte a plantei) au fost pregătite cu un microtom de rotație (Anglia Scientific 0325). Secțiunile au fost colorate în albastru de toluidină (0,02%) timp de 5 minute, spălate cu apă distilată (câteva secunde), 96% etanol (de două ori timp de 3 min fiecare), izopropanol (timp de 2 minute) și xilen (timp de 3 și 10) min). În cele din urmă, probele au fost acoperite cu Neomount. Diapozitivele au fost examinate cu microscopul NIKON Eclipse 80i și micrografiile au fost realizate cu software-ul Spot Basic 4.0.

În rădăcini și tulpini, următorii parametri au fost măsurați de Motic Images Plus ver. Software 2.0: grosimea epidermei, cortexului și stelei; în frunze: grosimea epidermei adaxiale și abaxiale, palisade și parenchim spongios.

Analiza statistică pentru studiul histologic

Datele măsurate au fost comparate cu ANOVA unidirecțională cu comparațiile perechi ale lui Tukey. Dacă ipoteza normalității a fost încălcată, am aplicat testul Kruskal - Wallis cu comparații în perechi Mann - Whitney. Normalitatea seriilor de date a fost verificată folosind testul Shapiro-Wilk. Toate statisticile datelor micromorfometrice au fost calculate cu software-ul statistic trecut, versiunea 2.17b (Hammer și colab. 2001). Cifrele au fost create de OriginPro 8 (OriginLab Corporation, SUA).

Rezultate

Date etnobotanice ale heleborilor

În sondajul nostru transilvănean, comparativ cu înregistrările anterioare ale acestei regiuni și ale altor țări europene, datele etnobotanice au fost documentate doar pe H. purpurascens, care este răspândită în zona de studiu. Celelalte doua Helleborus speciile nu au fost menționate în niciunul dintre siturile studiate. În aspect terminologic, numele local eszpenz a fost menționat în Lunca de Sus (Ghimeș), în mod similar cu înregistrările anterioare, confirmând utilizarea sa îndelungată în regiune. În plus, acest nume a fost de fapt colectat în valea Úz ca zonă geografică limitrofă cu Ghimeș (Tabelul 1). Numele vernaculare keserűgyökér (în Lunca de Sus) și papvirág (Lueta) au fost înregistrate ca date noi pentru specie.

Utilizarea tradițională efectivă a rădăcinii de H. purpurascens a fost documentat ca terapie imunostimulantă și extern numai în medicina etnoveterinară ca medicament semnificativ în „farmacie de acasă” (Fig. 1). Dintre acestea, efectul antiemetic a fost remarcat ca un nou record în Lueta: rădăcina trasă în nas sau urechile porcilor „colectează tulburările din nas, ceea ce duce la urechile inflamate”. Specia nu are date terapeutice umane în zonele studiate, dar a fost menționată și ca plantă ornamentală recoltată primăvara (Tabelul 1).

istorică

Helleborus purpurascens în „farmacie la domiciliu” din Cinod în 2007. A Planta uscata in toto, b rădăcină ca „drog de casă”

Studiu histologic

Micrografiile părților de plante studiate ale celor trei specii și parametrii lor cantitativi sunt prezentate în Fig. 2, 3, 4, 5 și 6. Studiul histologic comparativ al speciei a relevat o serie de caractere distinctive rezumate în Tabelul 2.

Tranzițiile părților vegetative ale Helleborus specii. Rădăcină, trage și respectiv frunze A, d, gH. niger, b, e, hH. odorus, c, f, euH. purpurascens; inserția prezintă structura stelei (indicată de cerc), cu trei fascicule de floem (indicate prin ovale) și între ele fascicule de xilem topite. (1) epidermă, (2) cortex, (3) stelă cu fascicule vasculare simple în rădăcină, (4) fascicule vasculare colaterale în tulpină. Epiderma ad-adaxială, parenchimul Pp-palisadă, parenchimul spongios, epiderma Ab-abaxială, fasciculul Vb-vascular. Săgețile indică stomatele. (Bara de scară: 200 µm, bara de scară a inserției: 100 µm)